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鬼臼毒素是存在于多种植物中的木脂素类化合物,其对多种害虫有良好的杀虫活性,且作用方式多样、作用机理特殊。西北农林科技大学无公害农药研究服务中心在对杀虫植物砂地柏进行系统研究的基础上,研制开发出以鬼臼毒素为主要成分的新型植物源杀虫剂--0.75%鬼臼毒素乳油。本文以鬼臼毒素为研究对象,开展了鬼臼毒素单克隆抗体制备研究,针对不同抗原-抗体反应特点建立了间接竞争ELISA方法,并在此基础上开展了鬼臼毒素在蔬菜上的残留检测研究。取得如下结果:1.采用不同的路线成功地合成了鬼臼毒素的人工抗原。通过丁二酸酐法成功地合成了半抗原4-O(单)琥珀酰鬼臼毒素;利用混合酸酐法(MAR)和碳二亚胺法(EDC)对半抗原与载体蛋白进行偶联,紫外扫描证明成功地合成了免疫和包被所需的人工抗原;Hapten与BSA的偶联比为45.8:1、Hapten与OVA的偶联比为26.5:1。2.鬼臼毒素人工抗原免疫Balb/c小鼠后,运用杂交瘤技术将脾细胞与瘤细胞系SP2/0融合,经多次筛选获得产生阳性抗体的杂交瘤细胞株6E5,植入小鼠腹腔生产腹水获得高效价鬼臼毒素单克隆抗体。在优化的工作条件下(用含5%甲醇的PBS溶液作为分析物的溶解剂、pH7.4PBS作为抗体的稀释液、包被抗原稀释2000倍、抗体稀释2×104倍做为最佳工作浓度)建立了鬼臼毒素IC-ELISA分析方法,线性检测范围为0.125-389.87 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为6.97ng/mL,最低检测线(IC10)为0.0326 ng/mL ;制备的单抗具有较高的特异性:与脱氧鬼臼毒素的交叉反应率为11.6%、与β-阿朴苦鬼臼交叉反应率为0.673%、与鬼臼毒素酰肼交叉反应率<0.0697%。3.在空白青菜样品中添加0 -10μg/mL的鬼臼毒素,经IC-ELISA分析鬼臼毒素的添加回收率为79.4-117.00%,变异系数2.3-15.5;经HPLC分析的添加回收率是81.80-114.40%,变异系数3.1-17.3。鬼臼毒素添加量在0.05-10μg/mL时,两种方法的添加回收率均大于79.4%,基本符合药物残留分析要求。分析结果的相关性好(y = 1.0141x + 0.0538 ,R2=0.9985)。当添加量低于0.05μg/mL时,HPLC无法检测而ELISA检测仍有较好的灵敏度,可见建立的IC-ELISA法适合样品中鬼臼毒素的分析,并且比HPLC法在超微量检测方面有较大优越性。