苏云金芽孢杆菌由于其对人畜无害，得到了广泛的应用，筛选具有高杀虫活性的菌株具有很重要的现实意义。对其杀虫基因的鉴定能够提供很好的基因资源，并且能够提供一种应对害虫抗性产生的方法。本研究采用PCR-RFLP鉴定体系，对本实验室所保存的250株野生苏云金芽孢杆菌进行基因型的鉴定，并对新cry基因进行克隆、异源表达和生物活性的研究，结果如下：1.本文所采用的PCR-RFLP鉴定体系对250株野生Bt菌株进行基因型的鉴定，发现含有cry1、cry2、cry3、cry4/10、cry8、cry11、cry30、cry34/35共8类基因。其中38株含有cry1基因，35株含有cry2基因，11株含有cry3基因，8株含有cry4/10基因，68株含有cry8基因，4株含有cry11基因，6株含有cry30基因，5株含有cry34/35基因。在基因组合方面，cry1+cry2所占比例最大，为30株，含有cry3+cry8基因组合的有5株，含有cry8+cry34/35，cry4/10+cry30，cry8+cry2基因组合的菌株各有一株。有134株菌未鉴定出基因型，可能含有未知的基因型，需要借助其他的方法对其进一步的研究。2.所有菌株的对小菜蛾、棉铃虫和华北大黑进行活性分析测定，40株对小菜蛾有杀虫活性，4d校正死亡率达到100%；21株对棉铃虫有杀虫活性，4d校正死亡率达到70%以上。经基因鉴定其均含有cry1类基因或cry2类基因。2株对华北大黑有杀虫活性，4d校正死亡率达到80%，经基因鉴定其cry8G类基因。菌株HYW8活性分析可得，对鳞翅目害虫小菜蛾、棉铃虫的2d校正死亡率达到100%，具有较高的活性；对美国白蛾的LC50为0.74 g/ml，杀虫效果高于HD-1。3.菌株SCC4和菌株JPL4中的cry基因经PCR鉴定未能确定其基因型，对其进行克隆测序发现：菌株SCC4经克隆得到的897bp的部分基因的序列，通过NCBI分析可得，与GenBank中已知的Bt基因cry8B delta-toxin-like gene（GenBank：FJ770571.1）的序列相似性最高，为91%；菌株JPL4经克隆得到的1362bp的部分基因的序列，通过NCBIBlast分析可得，与GenBank中已知的Bt基因相比较，未发现与其相似程度高的基因序列，推测其含有新的cry基因，有待进一步研究。4．菌株HYW8晶体蛋白分析，表明该菌株表达130kDa左右的晶体蛋白。经基因型鉴定其含有cry1Ab和cry1E基因和一种新cry2基因，推断130kDa左右的晶体蛋白为cry1类基因表达，cry2类基因在菌株中不表达，为沉默基因。5.从菌株HYW8中克隆了新cry2A基因，对cry2A基因序列测序结果表明，该基因编码区为1896bp，应用BLAST软件进行同源性比较显示该蛋白与cry2Ah2基因（登录号为FJ550343）编码蛋白的同源性最高为98%，由Bt基因国际命名委员会命名为cry2Ah3。6.从菌株FBG1的总DNA中克隆得到全长cry32基因，该基因编码区为3711bp，与cry32Aa1基因（登录号为AAG36711）的同源性最高为99%，提交GenBank注册，登录号为GU063849，并由Bt基因国际命名委员会命名为cry32Aa2，为第四等级的新基因，在国内首次发现。对其进行异源表达分析，在50mM IPTG，18℃，150rpm诱导条件下，在上清和沉淀均可以被检测到该基因表达产物，分子量约为140 kDa，活性分析发现对小菜蛾的校正死亡率2d为40%，4d达到60%，对棉铃虫活性较低2d为20%，4d为34%。