为了提高大肠杆菌细胞膜、壁的通透性并使之用于重组蛋白的胞外生产,本研究通过遗传方法构建渗漏菌株,研究胞内的目标蛋白在渗漏表达至胞外的特点。同时研究不同渗漏菌株和不同培养基对重组蛋白胞外生产的影响。在本研究中,使用大肠杆菌基因敲除策略构建了大肠杆菌细胞壁合成相关基因mrcA, mrcB, mrcA-TP和mrcB-TP以及细胞外膜合成基因pal和lpp(对照)的单基因突变菌株,然后进一步构建mrcA, mrcB, pal和lpp之间的双基因突变菌株。之后,为了测试这些渗漏菌株的重组蛋白胞外分泌效率,构建了以硫氧还融合蛋白形式表达的人甲状旁腺激素(Trx-hPTH)和以硫氧还融合蛋白形式表达的可溶型B淋巴刺激因子(Trx-sBLyS)的重组菌株。然后,在摇瓶条件下使用基础培养基(MR培养基)和复合培养基(TB培养基),分别进行了这些重组菌株目标蛋白的渗漏发酵实验,之后检测这些菌株的生长特性以及分布于细胞内和细胞外的目标蛋白的产量。最后,根据摇瓶发酵的条件,选用了两种双基因敲除菌株进行5L发酵罐的目标蛋白发酵实验。结果表明,本研究得到的渗漏菌株是遗传稳定的,而且这些菌株的生长周期和出发菌株相比是相似的。在MR培养基中pal单基因敲除菌株可实现220mg/L的Trx-hPTH蛋白胞外渗漏水平,而且mrcA和lpp双基因敲除菌株的88.9%重组蛋白渗漏比率比lpp单基因敲除菌株的71.1%和原始对照菌株的无渗漏要高。在TB培养基中所有的双基因敲除菌株的胞外重组蛋白水平都超过了单基因敲除菌株。在发酵罐中最高的胞外蛋白表达水平达到了680mg/l。