健康养殖是提高我国奶牛养殖水平、改善奶品质,增强市场竞争力的新型养殖模式,而奶牛乳腺炎是制约这一模式及奶牛养殖业发展的常见、多发性疾病之一。在我国的养殖场中约80%的奶牛乳腺炎是由病原微生物引起的,到目前为止,已经发现超过140种会导致奶牛乳腺炎的病原菌,其中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是最常见的致病菌。它是一种典型的革兰氏阳性菌,具有很强的致病性,可定植于奶牛的乳腺组织引起感染,极难根除。抗生素是目前防治此类由金黄色葡萄球菌等病原菌所引发的奶牛乳腺炎最主要的手段,但长期以来人们大量且不合理的使用抗生素促使金黄色葡萄球菌进化出了一些抵抗策略,使抗生素治疗效果减弱甚至丧失。抗生素耐受性便是其中的一种,它与慢性感染疾病中病原菌的无法根除现象有很大关系。本试验以金黄色葡萄球菌Newman为研究对象,利用生物化学及分子生物学手段,在实验室条件下诱导出金黄色葡萄球菌环丙沙星耐受菌,并通过基因组学测定和蛋白组学测定探究了该菌株耐受的分子机制。主要结果如下:（1）在实验室条件下诱导出金黄色葡萄球菌环丙沙星耐受菌株Cip-T8-seq:使用20倍MIC值的喹诺酮类抗生素环丙沙星（Ciprofloxacin）对Newman野生菌进行多周期、非连续性诱导,17个周期后获得三株诱导菌株Cip-T3-17、Cip-T5-17、Cip-T8-17,分别检测它们的MIC值和MDK,与Newman野生菌株相比,诱导菌株Cip-T8-17的MIC值不变,MDK显著延长,确认其为耐受菌株。（2）通过基因组学测定筛选到与耐受相关的遗传突变savRS:将具有耐受表型的菌株进行基因组学测定,通过和Newman野生菌序列比对,PCR、Sanger测序等筛选出了突变基因savRS（Ⅱ型TA系统）,并通过构建savRS的敲除、回补菌株,发现等位回补菌株的MDK回到野生水平,而敲除菌株的MDK与野生菌株相比无明显变化,即savRS的突变可以导致耐受表型,敲除并不能引起耐受表型;并根据这一实验结果提出假设:savRS突变后通过影响其他基因的表达来导致金黄色葡萄球菌的耐受。（3）通过蛋白组学测定找到下游与耐受表型直接相关的基因srrAB:为验证前面提出的假设将savRS突变菌株和Newman野生菌株进行蛋白组学测定,参照Uniprot蛋白数据库,使用Perseus对鉴定到的金黄色葡萄球菌蛋白进行统计分析,找到耐受菌株中表达量特异性显著变化的蛋白nos、srrAB、xseAB、NWMN-0808、arcA,并通过构建超表达菌株和表型检测一一验证它们与耐受表型的关系,成功筛选到与耐受表型直接相关的功能基因srrAB（TCS双组份系统）,最后还通过qRT-PCR和EMSA对savRS与srrAB的调控方式进行了初步探究。（4）耐受菌株的交叉耐受检测:分别检测耐受菌株对青霉素类抗生素（苯唑西林和氟氯西林）,糖肽类抗生素（万古霉素和替考拉宁）,喹诺酮类抗生素（环丙沙星和左氧氟沙星）,脂肽类抗生素（达托霉素）,碳青霉烯类抗生素（亚胺培南和美罗培南）,头孢类抗生素（头孢唑林和头孢匹罗）等不同作用机制的抗生素的耐受表型,结果表明菌株对青霉素类、糖肽类、环脂肽类抗生素无耐受表型,对碳青霉烯类、头孢类抗生素部分耐受,对喹诺酮类抗生素明显耐受。综上所述,本研究通过生物化学手段在实验室条件下成功诱导出金黄色葡萄球菌抗生素耐受菌Cip-T8-seq,并通过基因组学测定筛选出了耐受菌株中的遗传突变savRS,通过Newman-△savRS与Cip-T8-seq::savR菌株的构建和表型测定,证实savRS的突变导致毒素-抗毒素蛋白表面活性和亲和力发生变化,影响其他基因的表达从而导致了耐受;通过蛋白组学的测定和表型测定找到了与耐受直接相关的基因srrAB,并通过qRT-PCR和EMSA对savRS与srrAB的调控关系进行了初步探究。此外,本研究还检测了耐受菌株的多重耐受表型,结果表明此诱导菌株仅对喹诺酮类抗生素有明显耐受表型。