水稻α-膨胀素基因OsEXPA8的功能研究

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根系是高等植物吸收营养和水分的重要器官,同时也进行着物质的合成、转化及同化,此外,它还是与地上部分进行物质交换的代谢器官。植物对营养的吸收、植株的生长发育及产量水平等都与根系的长势密切相关。因此,根系在植物生长和发育过程中的作用至关重要。冠根和侧根是水稻根系的主要组成部分,冠根的伸展方向、侧根的多少和粗细以及它们的长度构成了形态各异的根系。  膨胀素是一种细胞壁松弛蛋白,对植物生长具有广泛的有效性,其功能的发挥基于植物细胞的酸生长理论。膨胀素基因是一个基因大家族,α-膨胀素(EXPA)和β-膨胀素(EXPAB)是其家族中两个较大的亚家族,其中EXPA亚家族是最大的。膨胀素蛋白一般由250-275个氨基酸组成,不同的膨胀素亚家族之间蛋白的相似性很低。水稻中至少有34个α-膨胀素基因,此外还有19个β-膨胀素基因。本论文研究了一个水稻根特异性表达的α-膨胀素基因OsEXPA8,研究内容和结果如下:  构建了OsEXPA8-GFP融合蛋白表达载体,并分析了该基因的时空表达特异性及对胁迫的响应:  ①洋葱表皮细胞瞬时表达系统结果表明,OsEXPA8定位于细胞壁上;  ②利用荧光定量PCR技术得知OsEXPA8的表达具有明显的时空特异性,在发芽7d后的根尖中表达量最高;  ③OsEXPA8基因在不同的胁迫条件下作出不同的响应,脱落酸和氯化钠胁迫处理后OsEXPA8基因的表达量显著增加,2,4-二氯苯氧乙酸和聚乙二醇6000胁迫处理后表达量基本没变,而吲哚-3-乙酸胁迫处理后该基因的表达量明显下降。  构建了OsEXPA8超表达载体35S::OsEXPA8,通过农杆菌遗传转化水稻,获得了35S::OsEXPA8超表达转基因水稻植株。35S::OsEXPA8转基因植株形态发生改变,与对照(未转基因)植株相比:  ①35S::OsEXPA8转基因植株高度、叶片的长度、宽度及厚度均显著增加;  ②35S::OsEXPA8转基因植株的根系明显发达,在体视显微镜和扫描电镜下发现超表达植株的根毛数量显著增多,根毛长度也明显增加;  ③35S::OsEXPA8转基因植株的结种率明显下降;  从细胞生物学角度分析了转基因植株形态改变的机制。结果如下:与对照相比:  ④35S::OsEXPA8转基因植株根和叶片维管束细胞的长度显著增加;  ⑤35S::OsEXPA8转基因悬浮培养体系中,细胞数量显著增多;  ⑥原子力显微镜测定了悬浮细胞的胞壁硬度,35S::OsEXPA8转基因悬浮细胞的胞壁硬度显著降低;  ⑦傅里叶变换远红外光谱分析仪(FTIR)测定了细胞壁的组成成分,35S::OsEXPA8转基因植株及悬浮细胞的胞壁中多糖/木质素比例显著升高。  采用动静态疲劳拉伸机测定35S::OsEXPA8转基因植株叶片的弹性模量,35S::OsEXPA8转基因植株叶片的弹性模量(杨氏模量)明显下降。  构建了OsEXPA8干扰载体OsEXPA8-RNAi,遗传转化水稻,获得转基因干扰植株。对干扰植株的研究分析得到;  与对照植株相比,干扰植株的根系发育不良,根系长度明显变短,而且根毛数量显著减少。
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