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目的：探讨如何从C57BL/6小鼠骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs)与内皮前体细胞(EPCs),并研究对其进行鉴定的方法,同时探讨EPCs与MSCs在非接触共培养体系里,MSCs对EPCs增殖的影响。方法：1.利用骨髓差速贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓中分离出MSC,流式细胞术检测第三代MSCs表面分子表达情况；诱导并检测其成骨、成软骨的分化能力。2.同样利用骨髓差速贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓中分离出EPC,流式细胞术检测第三代EPCs表面分子,并对其体外管腔结构形成实验进行功能的鉴定。3.取第三代的MSCs和EPCs,按1：1的比例接种入Transwell小室共培养体系中,实验组为：以下室接种EPCs,上室接种MSCs;对照组为下室接种EPCs,上室接种不含MSCs的空培养基。采用MTT比色法和BrdU荧光标记法检测MSCs对EPCs增殖能力的影响。结果：1.从C57BL/6J鼠骨髓腔中成功的分离了MSCs和EPCs,并对两者表面分子标志物进行检测。在分化潜能方面进行鉴定：MSCs经成脂分化、成软骨分化、成骨分化鉴定成功;EPCs经血管形成实验(Tube formation)鉴定成功。2.MTT比色法结果显示,在24、48、72、96小时实验组OD值都明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)3. BrdU荧光标记法结果显示与对照组相比较,实验组BrdU阳性细胞数比例显著增多(P<0.05)。结论：利用骨髓差速贴壁法,可分离、纯化及扩增到MSCs和EPCs,MSCs与EPCs在非接触共培养条件下能促进EPCs的增殖。目的：探讨胰岛素样生长因子1 (Insulin-like growth factor-1, IGF-1)及其下游胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor 1 receptor, IGF-1R)在间充质干细胞促进血管内皮前体细胞增殖过程中的作用。方法：1.使用ELISA方法检测MSCs与EPCs中IGF-1的表达情况；2.使用不同浓度的IGF-1分别刺激EPCs,检测EPCs的增殖情况。3.使用IGF-1-siRNA干扰MSCs中IGF-1的表达,使用IGF-1R-siRNA干扰EPCs中IGF-1R的表达,RT-PCR分别验证IGF-1mRNA和IGF-1RmRNA的表达量；4.MTT法分别检测各组EPC增殖情况。结果：1. MSCs培养液中的IGF-1的表达为远远高于EPCs培养液, 差异具有统计学意义(P<0.01)。2.不同浓度的IGF-1分别刺激EPCs,结果显示：20、50、100和200 ng/mL浓度的IGF-1均能使EPCs的数量及吸光度值较对照组都明显增加(P<0.05)。100 ng/mL的IGF-1能明显促进EPCs的增殖(P<0.05)。3. 使用IGF-1-siRNA干扰MSCs中IGF-1的表达,使用IGF-1R-siRNA干扰EPCs中IGF-1R的表达,RT-PCR检测IGF-1mRNA和IGF-1RmRNA的表达量明显下降(P<0.05)。4.MTT法分别检测各组EPC增殖,结果显示：IGF-1-siRNA干扰MSCs后,EPCs的增殖明显受到抑制,与对照组比较具有统计学意义(P<0.05);IGF-1R-siRNA干扰EPCs后,EPCs的增殖也明显受到抑制,与对照组比较仍具有统计学意义(P<0.05)。IGF1的中和抗体也能在MSCs促进EPCs增殖的过程中,起抑制EPCs增殖的作用(P<0.05)。结论：IGF-1可促进EPCs的增殖,可能通与其下游的IGF-1受体作用结合起作用。目的：初步探讨PI3K/Akt通路在MSCs促进EPCs增殖中的作用研究。方法：我们设计三组实验：1.EPC组2.EPC+IGF-1组3.EPC+IGF-1+LY294002组。使用合成的小分子LY294002,它是一种蛋白激酶抑制剂,能够特异性的阻断三磷酸酰肌醇蛋白激酶(Phosphotidylinsitol-3-Kinase, PI3K)细胞信号传导通路;使用MTT方法检测三组EPCs增殖情况；使用RT-PCR方法检测三组IGF-1受体因子mRNA的表达影响,用Western-blot方法检测三组磷酸化Akt蛋白的表达量。将转染GFP荧光的两组细胞：EPCs组和EPCs+IGF-1R siRNA组,分别移植进C57BL/6小鼠体内,利用荧光显微镜检测小鼠股动脉损伤模型动脉内膜壁上EPC增殖情况。以此浅探IGF-1对EPCs增殖的影响及其可能机制。结果：MTT结果显示,LY294002抑制IGF-1刺激下的EPCs增殖。RT-PCR结果提示加入IGF-1刺激因子的两组EPCs细胞,IGF-1受体因子mRNA的表达明显高于第一组(P<0.05);Western-blot结果提示使用PI3K特异性抑制剂LY294002组的Akt蛋白磷酸化水平明显下降。荧光显微镜检测发现EPCs组EPC增殖情况明显高于EPCs +IGF-1R siRNA组。结论：IGF-1可能通过激活PI3K/Akt通路来刺激EPCs的增殖。