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目的:建立微宇宙研究氮磷营养盐引发大肠杆菌对氨苄西林(AMP)、头孢唑林(CFZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(GM)、四环素(TE)、环丙沙星(CIP)和氯霉素(CHL)耐药表型产生的影响,了解富营养化对大肠杆菌产生对7种抗生素耐药性的影响,初步探讨氮磷营养盐引发大肠杆菌耐药的机理并了解富营养化与大肠杆菌耐药基因的相关性。方法:从福州森林公园采挖无抗生素污染的土壤,建立微宇宙。根据微宇宙中总氮(TN)、总磷(TP)浓度,设置4个剂量组,每个剂量设两个重复,分别添无菌硝酸铵(NH4NO3)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)营养液使TN、TP终浓度分别为1.5mg/L、4.5mg/L、8.5mg/L、12.5mg/L和0.15mg/L、0.45mg/L、0.85mg/L、1.25mg/L,造成不同程度的富营养化。采集第0d、1d、8d、16d、24d、32d、40d、68d、108d微宇宙中的水样及泥样,测定微宇宙7个水质指标,用综合营养状态指数TLI(∑)的值对其营养状态做出评价;用CLSI推荐的微量肉汤稀释法检测泥样中大肠杆菌对7种抗生素的敏感性,了解氮磷营养盐对大肠杆菌抗生素耐药表型的影响,探讨富营养化与大肠杆菌耐药表型的相关性;应用PCR方法检测tetA、tetB、cat、intI1基因,初步探讨氮磷营养盐引发大肠杆菌抗生素耐药的机理并了解富营养化与大肠杆菌耐药基因的相关性。结果:(1)添加不同剂量氮磷营养盐可以引发大肠杆菌对TE、CFZ、AMP和CHL产生耐药。高、中、低剂量组的TE耐药率变化比较接近,表现为先升高,后下降再升高;耐药出现的时间呈负相关,高、中、低剂量组耐药出现的时间分别为第16d、8d、1d,但耐药率与剂量无明显相关性。高、中、低剂量组的CFZ耐药率变化与TE耐药率变化接近,但低剂量组100%耐药的维持时间不同,100%CFZ耐药从第68d持续到第108d,100%TE耐药从第40d持续到第108d。低剂量组AMP、CHL耐药率变化同CFZ耐药率变化;中剂量组AMP、CHL耐药率与高剂量组耐药率变化接近,表现为仅第16d、24d、108d出现少量耐药菌株。添加不同剂量氮磷营养盐没有引发大肠杆菌对CTX、GM和CIP产生耐药,第1d-108d均未分离到耐CTX、GM、CIP的大肠杆菌。(2)微宇宙的营养水平用综合营养状态指数TLI(∑)的值进行评价,其对大肠杆菌产生TE、CFZ、AMP、CHL以及多重耐药的影响很明显,影响的程度比较接近。30≤TLI(∑)≤50,微宇宙处于中营养状态时,大肠杆菌耐药率几乎为0%。TLI(∑)>50,微宇宙处于富营养状态时,大肠杆菌耐药率上升,耐药率与TLI(∑)值呈一定程度正相关。当TLI(∑)约为80时,大肠杆菌耐药率下降。(3)对耐药菌株和敏感菌株进行tetA、tetB、cat、intI1基因检测。37株高水平耐四环素大肠杆菌tetA基因的阳性率为100%,66株低水平耐四环素大肠杆菌的tetA基因的阳性率为16.67%;16株对四环素敏感的大肠杆菌未检出tetA基因。无论是对四环素敏感还是对四环素耐药的大肠杆菌均未检测到tetB基因。46株耐氯霉素大肠杆菌cat基因的阳性率为89.13%;16株对氯霉素敏感的大肠杆菌未检出cat基因。56株多重耐药大肠杆菌intI1基因阳性率为92.85%;16株对试验中7种抗生素均敏感的大肠杆菌未检出intI1基因。结论:(1)添加氮磷营养盐可引发微宇宙中大肠杆菌对四环素、头孢唑啉、氨苄西林和氯霉素产生耐药,没有引发大肠杆菌对头孢噻肟、环丙沙星和庆大霉素耐药。(2)添加不同剂量氮磷营养盐导致微宇宙营养水平发生改变,不同的营养状态对大肠杆菌产生四环素、头孢唑啉、氨苄西林、氯霉素及多重耐药相似,均表现为:富营养化可以引发大肠杆菌产生耐药,轻度富营养化和中度富营养化对大肠杆菌耐药性的产生及维持时间起明显作用。(3)氮磷营养盐引发大肠杆菌对四环素高水平耐药与tetA基因有关,与tetB基因无关;对氯霉素耐药与cat基因有关,多重耐药性与intI1基因有关。耐药基因型与耐药表型有很强相关性。