羊传染性脓疱病毒（Contagious ecthyma virus,CEV）,俗称羊口疮病毒（Orf virus,ORFV）,主要引起绵羊、山羊特征性的“口疮”病变,人也可接触感染,是一种重要的人兽共患传染病病原,对我国养羊业的健康发展以及公共卫生的安全有着较大影响。ORFV基因组庞大,编码蛋白众多,至今仍有许多蛋白功能尚不清楚,严重制约了疫苗的研发,当前尚无效果确实的疫苗用于该病的免疫防控。因此,开展安全有效的ORFV疫苗研究工作,对于该病的防控意义重大。减毒活疫苗因其接种剂量小、安全等优点成为新型疫苗研发的一个重要发展方向。近期针对ORFV ORF120和ORF121基因编码蛋白功能的研究表明,ORF120和ORF121基因是重要的毒力因子,因此可作为减毒疫苗的靶标。本研究利用同源重组技术,通过构建携带绿色荧光蛋白的p UC57-LFΔORFs120-121-e GFP-RFΔORFs 120-121重组穿梭质粒,将其转染ORFV野毒株感染细胞,经荧光筛选、蚀斑纯化、PCR鉴定等方法,成功筛选、鉴定获得ORFV ORF120和ORF121双基因缺失减毒株,命名为ORFV-SYΔORFs 120-121双基因缺失减毒株。利用一步和多步生长曲线对ORFV-SYΔORFs 120-121重组毒株的体外生殖能力进行评估,结果表明,该重组毒株与野毒株的复制增殖能力基本一致,病毒滴度无明显变化,表明ORF120和ORF121基因的缺失不影响其在宿主细胞的复制增殖。为明确ORFV-SYΔORFs 120-121重组毒株的安全性及免疫保护效果,评价其作为疫苗候选株的应用前景,本研究将ORFV-SYΔORFs 120-121重组毒株分别经皮下/划痕途径免疫羔羊,结果显示,皮下和划痕接种途径均能诱导机体较强的免疫保护,主要是Th1型免疫应答反应;抗体水平被发现在接种后2 w达到最高,但持续时间较短;该结果与ORFV主要诱导细胞免疫的特性相一致。动物攻毒保护性试验结果显示,皮下和划痕接种ORFV-SYΔORFs 120-121重组毒株均可为为ORFV提供良好的免疫保护。综上,ORFV-SYΔORFs 120-121重组毒株有望作为ORFV减毒活疫苗的候选疫苗毒株,为临床上针对羊传染性脓疱病的防控提供重要的技术支撑。