目的:通过对分离于我国不同利什曼病流行区的利什曼原虫分离株的分子标志进行序列分析,以阐明我国不同流行区利什曼原虫分离株间的亲缘关系并进行分子分型,筛选出合适的分子标志应用于我国利什曼原虫的鉴定。方法:通过设计并合成特异引物对我国利什曼原虫分离株K26、mini-exon、cpa和7SL RNA基因序列进行PCR扩增及测序,应用MEGA7.0软件中Clustal W方法对获得的相应序列进行比对,引用从GenBank下载同源性较高相应利什曼原虫分离株的K26、mini-exon、cpa和7SL RNA的基因序列及测序获得的相应分子标志序列,应用MEGA7.0软件邻接法构建相应序列的系统发育树。结果:应用特异引物扩增我国利什曼原虫分离株K26基因序列,从来自人源型黑热病流行区的3个分离株均扩增出920 bp单一片段,从来自自然疫源型黑热病流行区的4个分离株均扩增出491 bp单一片段,从来自人-犬共患型黑热病流行区的4个分离株均扩增出404 bp单一片段,从来自皮肤利什曼病流行区的5个分离株均扩增出449 bp单一片段,来自各流行区内虫株间的序列一致性均为100%,而各流行区之间的虫株序列一致性在40.2%～91.4%之间。系统发育树结果表明,我国16个利什曼原虫分离株聚集成2个群3个亚群,其中来自皮肤利什曼病流行区和来自自然疫源型黑热病流行区的分离株聚集为A亚群,来自人-犬共患型黑热病流行区的虫株与婴儿利什曼原虫序列聚集为B亚群,A亚群和B亚群进一步聚集为I群;来自人源型黑热病流行区的分离株与杜氏利什曼原虫聚集为C亚群,进一步与国际参照株DD8聚集为Ⅱ群。应用特异引物扩增我国利什曼原虫分离株mini-exon基因序列,从来自人源型黑热病流行区的3个分离株均扩增出434 bp单一片段,从来自自然疫源型黑热病流行区的4个分离株均扩增出385 bp单一片段,从来自人-犬共患型黑热病流行区的4个分离株均扩增出395 bp单一片段,从来自皮肤利什曼病流行区的5个分离株均扩增出425 bp单一片段,且各流行区内虫株间的序列一致性均为100%,而各流行区之间的虫株序列一致性在87.4%～97.5%之间。系统发育树结果表明,我国16个利什曼原虫分离株聚集成2个亚群,并进一步聚集为1个群。其中来自皮肤利什曼病流行区的分离株,自然疫源型黑热病流行区和人-犬共患型黑热病流行区的分离株与婴儿利什曼原虫聚集为A亚群,来自人源型黑热病流行区的分离株与杜氏利什曼原虫分离株聚集为B亚群,A亚群和B亚群进一步聚集为Ⅰ群。应用特异引物扩增我国利什曼原虫分离株cpa基因序列,我国16个利什曼原虫分离株均扩增出1058 bp单一片段,各流行区内虫株间的序列一致性均为100%,而各流行区之间的虫株序列一致性在99.3%～99.9%之间。系统发育树结果表明,我国16个利什曼原虫分离株聚集成2个亚群,并进一步聚集为1个群。其中来自皮肤利什曼病流行区的分离株,自然疫源型黑热病流行区分离株和人-犬共患型黑热病流行区的分离株与婴儿利什曼原虫聚集为A亚群,来自人源型黑热病流行区的分离株与杜氏利什曼原虫聚集为B亚群,A亚群和B亚群进一步聚集为Ⅰ群。应用特异引物扩增我国利什曼原虫分离株7SLRNA基因序列,我国16个利什曼原虫分离株均扩增出119bp单一片段,且各分离株间的序列一致性均为100%。系统发育树结果表明,我国16个利什曼原虫分离株与婴儿利什曼原虫和杜氏利什曼原虫聚集为I群。结论:来自我国同一利什曼病流行区的利什曼原虫分离株完全同源,而来自不同流行区利什曼原虫分离株间显示高度多态性。K26序列是鉴定我国利什曼原虫理想的分子标志,依此序列可将我国利什曼原虫分离株区分为四个分子类型。