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食物过敏（Food allergy,FA）是一种由食物抗原引起的Th2型免疫反应。轻者会出现荨麻疹、喘息、咳嗽、恶心呕吐及腹泻等症状,重者可致过敏性休克,危及患者生命。近年,因其不断增高的发病率、严重程度及有限的防治手段,食物过敏已经成为影响人类生活和健康的重要公共卫生问题。研究发现幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）中性粒激活蛋白A（Neutrophil-activating protein A subunit,NapA）具有促进免疫反应向Th1型极化的作用,但其在体内对食物过敏反应的作用尚不明确。目的该研究通过构建小鼠食物过敏模型,采用食品级乳酸乳球菌（Lactobacillus lactis,L.lactis）作为幽门螺杆菌NapA蛋白的黏膜递送载体,探讨其对食物过敏的调节作用,为食物过敏的防治研究提供新思路。方法1.重组乳酸菌培养鉴定与NapA蛋白表达分析:复苏培养重组乳酸菌菌株（L.lactis NZ3900/pNZ8149-napA）,对菌体质粒进行基因测序鉴定;诱导表达后,对菌体蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。2.动物过敏模型构建:选用鸡卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）作为抗原,通过腹腔致敏和灌胃攻击,构建小鼠的食物过敏模型,同期施加乳酸菌干预。3.重组乳酸菌对小鼠食物过敏调节作用评价:在每次攻击后30-60分钟内,观察评价小鼠的食物过敏症状;末次攻击后,收集处理小鼠样本,用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中特异性抗体（OVA-IgE和IgG1、IgG2a）、组胺（histamine）及脾脏组织匀浆液中的细胞因子（IL4、IL10和IFN-γ）;用实时荧光定量PCR技术（q PCR）检测十二指肠中紧密连接蛋白（Ocln、Tjp1和JAM1）的m RNA表达水平;用苏木精-伊红（HE）和甲苯胺蓝（TB）染色等方法,制作空肠组织病理学切片,分别观察肠道黏膜的完整性、免疫细胞的浸润情况和肥大细胞的形态及迁移情况。4.统计学分析:等级资料多组间比较时选用Kruskall-Wallis秩和检验,组间两两比较时选用Dunn检验。计量资料多组间比较时选用单因素方差分析（ANOVA）,组间两两比较时选用Tukey或Games-Howell检验。结果1.重组乳酸菌培养鉴定与NapA蛋白表达分析:重组乳酸菌质粒中NapA的基因序列与Gen Bank上公布的幽门螺杆菌NapA序列（AY366361.1）保持一致;重组乳酸菌可以表达分子量约为17 KD的NapA蛋白,且NapA的表达量约占菌体总蛋白的14.0%。2.食物过敏症状观察评价:与阳性对照组和LL（8149）组相比,LL（8149-NapA）组的症状评分折线增幅较为缓慢;末次攻击后,LL（8149-NapA）组的腹泻症状评分显著低于阳性对照组的评分（P<0.05）。3.血清特异性抗体和组胺水平检测:LL（8149-NapA）组的OVA-IgG1抗体和组胺水平显著低于阳性对照组的表达水平（P<0.05）;与LL（8149）组和阳性对照组相比,LL（8149-NapA）组的IgG2a显著升高（P<0.05）。4.脾脏组织匀浆及细胞因子检测:与阳性对照组相比,LL（8149-NapA）组的IL4水平显著降低,IL10和IFN-γ的水平明显增高（P<0.05）。5.肠道屏障功能检测:与阳性对照相比,LL（8149-NapA）组与阴性对照组的肠道紧密连接蛋白（JAM1和Tjp1）的m RNA表达水平明显增高（P<0.05）。6.空肠组织病理学检测:HE染色结果显示,阳性对照组的肠道黏膜完整性和绒毛结构被破坏,存在黏膜下水肿和免疫细胞浸润等现象,而LL（8149-NapA）组的肠道炎症程度明显减轻;TB染色结果显示,阳性对照组和LL（8149）组可观察到向空肠固有层迁移的肥大细胞,而LL（8149-NapA）组和阴性对照组未观察到迁移的肥大细胞。结论1.采用乳酸菌灌胃的方式,向胃肠道黏膜传递幽门螺杆菌NapA蛋白,可以有效缓解小鼠对OVA的食物过敏反应。2.幽门螺杆菌NapA可以减轻以急性腹泻和肠道炎症为主的小鼠食物过敏症状,这种缓解作用可能与免疫调节和/或肠道屏障功能增强有关。3.表达幽门螺杆菌NapA的乳酸菌工程菌株——L.lactis NZ3900/pNZ8149-napA在食物过敏防治方面具有潜在的研究价值。