【摘 要】
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目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞及裸鼠侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和一个阴性对照载体,通过RT-PCR检测mRNA水平的表
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目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞及裸鼠侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和一个阴性对照载体,通过RT-PCR检测mRNA水平的表达,并通过western blot和细胞免疫荧光检测蛋白水平的表达;观察细胞形态及细胞微丝骨架的变化;通过western blot和细胞免疫荧光检测p-AKT和p-GSK-3β的变化;检测细胞迁移、粘附和侵袭能力及基质金属酶的变化;通过MTT检测细胞生长情况的变化;荧光双标检测ILK与RI的关系;分别将ILK-siRNA和对照组EJ细胞注入裸鼠皮下,4周后检测肿瘤的大小、血管密度、侵袭及转移的影响。结果重组质粒构建成功,干扰组细胞mRNA及蛋白的表达均被显著抑制;细胞铺展良好,核质比减小;细胞骨架被破坏;P-AKT及P-GSK3β受到抑制;粘附显著增强,迁移及侵袭能力显著降低,MMP-2及MMP-9表达显著降低,NM23-H1及E-Cadherin表达增高;细胞生长受到抑制;ILK与RI都表达于胞浆,二者可能存在某些联系;裸鼠种植EJ细胞4周后,实验组与对照组相比,细胞在裸鼠皮下形成的肿瘤体积及血管密度明显减小,侵袭和转移能力受到抑制。结论成功构建干扰质粒,抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力,破坏EJ细胞骨架,从而在一定程度上抑制了肿瘤的生长及转移。
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