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目的:为了获取胃粘膜癌变相关蛋白质,课题组前期通过同位素标记定量蛋白质组学技术,发现Annexin A1蛋白与胃癌发生有关。本课题组研究Annexin A1在GES1细胞生长增殖中的作用及机制,为进一步阐明胃癌发病的分子机制提供实验依据。方法:1、将pCDNA3.1-Annexin A1表达载体转染GES1细胞(以pCDNA3.1载体为阴性对照),经400μg/mLG418筛选,汇合克隆,建立Annexin A1高表达GES1细胞系(GES1-Annexin A1细胞,GES1-pCDNA3.1为对照),然后采用细胞免疫荧光与Western-blot方法,检测GES1-Annexin A1细胞中Annexin A1的表达情况。2、通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆形成实验、软琼脂集落形成实验及流式细胞术等方法,检测Annexin A1高表达后,GES1细胞的生长增殖情况。3、Western-blot检测GES1-Annexin A1细胞中Wnt1与β-catenin的表达情况。结果:1.绘制细胞生长曲线,曲线趋势显示,与GES1和GES1-pCDNA3.1细胞比较,Annexin A1高表达后,GES1-Annexin A1细胞的生长明显加快(P<0.01);2、平皿克隆形成实验结果显示,GES1、GES1-pCDNA3.1与GES1-Annexin A1细胞形成的克隆数分别为54.04±6.12、57.23±9.16和162.22±12.52。与GES1和GES1-pCDNA3.1细胞比较,GES1-Annexin A1细胞形成克隆数明显增加,形成克隆体积变大,实验结果说明Annexin A1高表达后,GES1细胞的生长增殖能力增强(P<0.01);3、软琼脂集落形成实验结果显示,GES1、GES1-pCDNA3.1与GES1-Annexin A1细胞形成的集落分别为106.34±21.54、112.65±26.36和265.14±48.36。与GES1和GES1-pCDNA3.1细胞比较,GES1-Annexin A1细胞形成集落数目增加,体积明显变大,实验结果说明Annexin A1高表达后,GES1细胞的生长增殖能力增强(P<0.01);4、流式细胞仪检测结果显示,GES1、GES1-pCDNA3.1与GES1-Annexin A1细胞中分别S期占比为25.17±1.65、36.26±1.82和60.04±3.84,G1期占比分别为58.30±3.28、56.13±2.38和37.95±1.45,计算后三种细胞的增殖指数分别为41.70、43.88和62.05;结果说明Annexin A1高表达后,GES1细胞中S期占比明显增加,G1期占比降低,以及细胞增殖指数增加(P<0.01);同时,GES1、GES1-pCDNA3.1与GES1-Annexin A1三组细胞的凋亡率分别为12.62±1.23、11.67±1.06、1.89±0.12,结果说明Annexin A1高表达后,GES1细胞凋亡率降低(P<0.01)。5、Western-blot结果显示:GES1-Annexin A1细胞中Wnt1蛋白表达水平较对照组GES1和GES1-pCDNA3.1细胞增加,β-catenin蛋白表达也增加,而β-catenin蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.01)。结论:Annexin A1通过活化Wnt1/β-catenin通路,抑制GES1细胞凋亡,促进细胞的生长增殖。