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木薯(Manihot esculenta Crantz)是一种重要的生物质能源材料,也是一种重要的粮食作物。前人已先后利用不同的分子标记技术构建了多张遗传图谱,但遗传图谱与染色体的对应关系尚不明确。除本课题组成员初步对Chen等(2010)及Sraphet等(2011)发表的两张木薯遗传图谱的部分连锁群与其相应染色体进行整合外,其余连锁群与核型的对应关系仍不清楚。针对上述情况,本研究利用荧光原位PCR技术对从木薯遗传图谱5个连锁群上选取的10个标记位点进行了物理定位,并将这些标记位点所属的连锁群与木薯核型进行对应整合,为构建木薯分子细胞遗传图谱奠定了基础。本研究所得结果具体如下:(1)从Rabbi等(2012)发表的木薯遗传图谱上的9号连锁群两端选择一个标记合成NS701-L9和NS272-L9共两对引物。其中引物NS701-L9在华南6号木薯上扩增出一个约1000bp的片段,引物NS272-L9在华南6号上扩增出两个片段,大小约在160-200bp之间。从Sraphet等(2011)发表木薯遗传图谱的7号、9号、14号和20号等4个连锁群的两端各选择一个标记,共选取8个标记合成NS158-L9、NS198-L9、NS978-L7、SSRY160-L7、SSRY194-L20、SSRY2-L20、SSRY44-L14、SSRY248-L14等8对引物。其中引物NS158-L9在华南6号上扩增出两个片段,大小约在160-200bp之间,NS198-L9在华南6号上扩增出一个约200bp的片段,NS978-L7与SSRY160-L7在华南6号上均扩增出一个片段,片段大小依次为240bp和140bp,SSRY194-L20和SSRY2-L20在华南6号上均扩增出一个片段,片段大小依次为295bp和100bp,SSRY248-L14在华南6号上扩增出一个约250bp的片段,SSRY44-L14在华南6号上扩增出三个片段,大小约在100-180bp之间。(2)通过对Rabbi等(2012)发表木薯遗传图谱9号连锁群两端的NS701和NS272两个标记进行原位PCR定位研究并核型分析,将NS701标记和NS272标记依次定位在华南6号第9号染色体的短臂和长臂上,其扩增位点到着丝粒的百分距离分别为70.66和30.11。通过对中期细胞进行核型分析,结果发现NS701与NS272两个标记被定位于同一染色体的两臂上,表明Rabbi等(2012)发表的木薯遗传图谱9号连锁群对应的是华南6号第9号染色体。(3)通过对Sraphet等(2011)发表木薯遗传图谱9号连锁群两端的NS158和NS198两个标记进行原位PCR定位研究并核型分析,将NS158标记和NS198标记依次定位在华南6号第3号染色体的短臂和长臂上,其扩增位点到着丝粒的百分距离分别为59.07和66.58。通过对中期细胞进行核型分析,结果发现NS158与NS198两个标记被定位于同一染色体的两臂上,表明Sraphet等(2011)发表的木薯遗传图谱9号连锁群对应的是华南6号第3号染色体。(4)通过对Sraphet等(2011)发表木薯遗传图谱7号连锁群两端的NS978和SSRY160两个标记进行原位PCR定位研究并核型分析,将NS978标记和SSRY160标记依次定位在华南6号第2号染色体的短臂和长臂上,其扩增位点到着丝粒的百分距离分别为82.82和27.60。通过对中期细胞进行核型分析,结果发现NS978与SSRY160两个标记被定位于同一染色体的两臂上,表明Sraphet等(2011)发表的木薯遗传图谱7号连锁群对应的是华南6号第2号染色体。(5)通过对Sraphet等(2011)发表木薯遗传图谱20号连锁群两端的SSRY2和SSRY194两个标记进行原位PCR定位研究并核型分析,将SSRY2标记和SSRY194标记依次定位在华南6号第8号染色体的短臂和长臂上,其扩增位点到着丝粒的百分距离分别为45.12和75.82。通过对中期细胞进行核型分析,结果发现SSRY2与SSRY194两个标记被定位于同一染色体的两臂上,表明Sraphet等(2011)发表的木薯遗传图谱20号连锁群对应的是华南6号第8号染色体。(6)通过对Sraphet等(2011)发表木薯遗传图谱14号连锁群两端的SSRY44和SSRY248两个标记进行原位PCR定位研究并核型分析,将SSRY44标记定位在华南6号第13号染色体的长臂,其扩增位点到着丝粒的百分距离为71.99;将SSRY248标记定位于华南6号第8号染色体的长臂上,其扩增位点到着丝粒的百分距离为69.83。发现SSRY44与SSRY248两个标记被定位于不同的染色体上,可进一步推测Sraphet等(2011)发表的木薯遗传图谱14号连锁群可能是由两个连锁群的各一部分拼接而成。