对于婴幼儿型青光眼这一与遗传高度相关的疾病,目前已知的与发病相关的基因座有三个:GLC3A、GLC3B和GLC3C,而仅在GLC3A位点找到了致病基因——CYP1B1,该基因在不同人群患者中存在明显的遗传异质性。本研究将首先着眼于CYP1B1基因在中国汉族人群中的突变情况,进而揭示其基因型-表现型-手术疗效关系,来为临床诊断及治疗提供分子生物学依据。在排除这一已知基因致病的患者中,进一步分析疾病与其他两个候选位点的关系。不同于既往研究的是:1.在寻找基因突变的基础上,结合了临床发病特征的数据,构建出基因型-表现型关系,还结合手术疗效的随访数据,发掘出基因对临床预后的影响作用;2.全部采用了散发病例,验证了从家系病例定位的基因座,使其具有更高的可信度;3.尚未有中国汉族病例GLC3B和GLC3C位点的研究报道。　　 第一部分 CYP1B1基因与婴幼儿型青光眼表型及疗效关系　　 目的:了解中国汉族人群婴幼儿型青光眼的CYP1B1基因突变情况并探寻CYP1B1基因型-表现型-疗效关系。　　 方法:　　 1.对122例散发的婴幼儿型青光眼患者外周血DNA采用PCR扩增、直接测序法,进行CYP1B1基因编码外显子的突变检测,序列图与正常人群数据库及120份正常对照样本序列比对;　　 2.对238例患者进行基因型.表现型回顾性分析(结合本课题组前期己行突变筛查的116例实验数据),分析因素包括:性别、单/双眼发病、发病年龄、起病眼压、角膜横径、角膜透明度评分;　　 3.对其中在我院首次手术的192例(306只眼)进行影响手术疗效的多因素分析,分析因素包括:发病年龄、发病-手术时间、手术方式、术前眼压、角膜横径、角膜透明度评分、CYP1B1基因携带状态7个因素与手术成功疗效进行多元Logistic回归分析(Stepwise逐步回归法)、与手术成功时间进行Cox回归生存分析(Stepwise逐步回归法)。　　 数据采用SPSS13.0统计学软件分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义。　　 结果:　　 1.122份样本中的CYP1B1基因编码外显子区域一共检测出18种不同的突变,其中9种突变为本研究首次发现:g.3836T＞C(p.11W＞R),g.4022delTC(p.73ORFshift,p.221stop),g.4151G＞T(p.116D＞Y),g.4322G＞A(p.173E＞K),g.4338T＞A(p.178V＞E),g.4493G＞A(p.230E＞K),g.4509T＞C(p.235V＞A),g.8137T＞C(p.434W＞R),g.8167C＞T(p.R444stop)。共21份病例样本检出突变,突变率为17.2％。　　 2.综合本课题组前期实验数据,共238例(116+122)散发婴幼儿型青光眼患者,检测到致病突变的有41例(20+21),总突变率仍为17.2％。其中男性患者的突变率为18.9％,女性患者的突变率为13.0％,差异无统计学意义。双眼患者的突变率为19.5％,单眼患者的突变率为12.7％,差异无统计学意义。携带突变患者的中位数发病年龄为2(0-6)月,不携带突变患者的中位数发病年龄为6(2-12)月,前者的发病时间明显的早于后者,差异具有统计学意义(P＜0.05),角膜透明度评分在携带突变患者中更高(P＜0.05)。　　 3.多元Logistic回归分析,得到CYP1B1基因为手术疗效的相关影响因素(P＜0.001),其比值比为Orcretst=0.321。Cox回归生存分析,得到角膜透明度和CYP1B1基因为与手术成功时间的相关影响因素(P＜0.01),其比值比分别为ORConea=1.846,ORCYP1B1=0.468。　　 结论:CYP1B1基因的突变与部分婴幼儿型青光眼的发病相关,基因编码外显子区域共检测出18种不同的突变,其中9种突变为本研究首次发现:携带CYP1B1基因突变的患者较无突变者发病年龄更小,角膜透明度更差;CYP1B1基因突变状态为手术疗效的保护性因素,相对无突变患者有更高的手术成功率和更长的手术成功时间。　　 第二部分 婴幼儿型青光眼候选位点的遗传学研究　　 目的:探讨散发中国汉族婴幼儿型青光眼患者与候选位点GLC3C的关联关系;了解GLC3B位点中候选基因ANGPTL7的突变状况。　　 方法:　　 1.研究对象为中国汉族人群,患者为第一部分中排除携带CYP1B1基因突变者的152个核心家系(患者加正常双亲),采用荧光标记复合扩增技术,进行覆盖GLC3C位点的12个STR分型,分型结果行传递不平衡检验;　　 2.对获得的阳性区间,进一步挑选16个htSNP进行单倍型构建,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术,对126个核心家系进行SNP分型,分型结果行传递不平衡检验;　　 3.随机抽取96名患者的DNA制作混合样本池,对GLC3B区域内候选基因ANGPTL7的5个外显子行PCR扩增,直接测序后与数据库正常序列比对。　　 结果:　　 1.GLC3C区域内单个STR分型的传递不平衡检验结果显示,在D14S279、D14S555和D14S74的P值＜0.05(分别为0.021,0.009601和0.003421),相距仅0.006cM;　　 2.阳性区间内所有单个htSNP与疾病的传递不平衡检验P值均＞0.05;位于单倍型模块2(rs2111701-rs4020123-rs4903696-rs11159318-rs177216)的TAACG单倍型与疾病的传递不平衡检验P值＜0.05(P=0.001),经过10000次的置换检测,该单倍型尸值仍P＜0.05(P=0.0135);　　 3.对于GLC3B区域内候选基因ANGPTL7的5个外显子序列,6份混合样本(含96人DNA)与数据库正常序列比对,无杂合峰发现。　　 结论:GLC3C位点与中国汉族婴幼儿型青光眼的发病相关;在22kb区间内的5个htSNP单倍型与疾病发病相关,致病基因的确定有待进一步的候选基因筛查。GLC3B区域内候选基因ANGPTL7可能与中国汉族婴幼儿型青光眼的发病不相关。