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在本实验室内,用德国AB珊瑚高钙盐配制水质条件为盐度30、pH8.1、温度28℃、溶氧量6.0mg/dm3的海水,以孵化、养殖海水青鳉(marine medaka,Oryzias melastigma)仔鱼。以大小相近、体色正常、活泼的10d龄仔鱼为研究对象。用不同剂量(0-250 μg/L)镉(cadmium,Cd)和2,2,4,4,5,5-六氯联苯(2,2’,4,4’,5,5’-hexachlorobiphenyl,PCB153)对海水青鳉仔鱼暴毒 2 周;用不同剂量黄腐酸(fulvic acid,FA)和Cd-PCB153(200-200 μg/L)混合液再对海水青鳉仔鱼暴毒2周,分别研究Cd-PCB153以及FA和Cd-PCB153对海水青鳉仔鱼RNA/DNA和Sonic hedhehog(Shh)基因相对表达量的影响。暴毒和FA处理混合液再暴毒实验后,提取全鱼DNA、RNA,测定海水青鳉仔鱼RNA/DNA的变化,再通过反转录-PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)、实时荧光定量 PCR(Real Time Quantitative PCR,RTQ-PCR)等手段,测定其Shh基因的循环阈值(circulating threshold,Ct),再用2-△△Ct法对实验仔鱼中Shh基因表达量进行计算和分析。结果如下:1、在本实验条件下,不同剂量(0-250μg/L)Cd-PCB153联合对海水青鳉仔鱼暴毒2周,能显著降低(P<0.05)其RNA/DNA和Shh基因的相对表达量,且鱼体中的Cd和PCB153含量随着水体Cd和PCB153初始剂量升高而升高。对照组 GO(Cd-PCB153,0-0μg/L)的 RNA/DNA 为 1.30±0.01,代表Shh基因相对表达量的2-△△Ct值为1.82±0.03,最终鱼样品Cd、PCB153都未检测到,而最高毒物浓度组G5(Cd-PCB153,250-250 μg/L)RNA/DNA仅为1.00±0.04,2-△△Ct值为1.33±0.04,最终鱼样品Cd、PCB153分别为(70.20±1.93)、73.64±1.82)μg/g。当 Cd-PCB153 剂量低于 200 μg/L 时,RNA/DNA和Shh基因相对表达量随着Cd-PCB153剂量的增加而降低。当Cd-PCB153浓度达到200 μg/L及其以上时各指标已基本稳定,即Cd-PCB153(200-200 μg/L)已达海水青鳉仔鱼最大毒性剂量。2、本实验条件下,FA能显著降低(P<0.05)Cd-PCB153对海水青鳉仔鱼RNA/DNA和Shh基因相对表达量的影响,且鱼体中的Cd和PCB153含量随着水体FA初始剂量升高而降低。对照组G0(0 mg C/L)的RNA/DNA为0.93±0.04,代表Shh基因相对表达量的2-△△Ct值为0.98±0.03,最终鱼样品 Cd、PCB153 分别为(69.04±1.21)、73.91±2.37)μg/g 而用FA(60 mg C/L)处理 Cd-PCB153(200-200 μg/L)实验组的 RNA/DNA 为 1.28±0.00,2-△△Ct值 1.91±0.05,最终鱼样品 Cd、PCB153 分别为(8.33±0.57)、(8.97±0.48)μg/g。当FA剂量低于60 mg C/L时,RNA/DNA和Shh基因的相对表达量与FA剂量正相关。当FA浓度达到60 mg C/L及以上时,各指标基本稳定,即FA 60 mg C/L 是 Cd-PCB153(200-200 μg/L)的适宜解毒剂量。