论文部分内容阅读
大黄鱼（Larimichthyscrocea）隶属于硬骨鱼纲，鲈形目（Perciformes），石首鱼科（Sciaenidae），黄鱼属。又名黄鱼、大鲜、金龙、红口等，宁波等地市1997年引进福建大黄鱼养殖后，发现冬季越冬水温过不了8oC，年年有大黄鱼被冻死，为此选育了大黄鱼“东海1号”耐低温和生长较快的新品种。通过以“东海1号”为实验材料，采用多样性芯片技术（DiversityArraysTechnology，DArT）筛选了大黄鱼耐低温性状相关分子标记，为“东海1号”选育提供了理论依据。结果如下：对“东海1号”进行低温筛选试验，得到了在水温9oC以上有死亡征兆的七条对低温敏感的“东海1号”大黄鱼低温敏感群体和在水温6oC以下仍健康存活的七条耐低温的“东海1号”大黄鱼耐低温群体。以低温筛选实验中得到的低温敏感群体和耐低温群体作为实验材料。将低温敏感群体和耐低温群体的基因组DNA等量混合，选择七种降低基因组复杂度方法(PstI/Alu I、Pst I/Ban II、Pst I/Bsp1286I、Pst I/BstN I、Pst I/Hae III、Pst I/Rsa I、Pst I/Taq I)降低大黄鱼基因组DNA的复杂度，并分别构建了对应的DArT文库，7个文库库容均＞105，插入片段平均长度＞500bp。从上述7个文库中各随机挑取840个克隆，以其插入片段为探针，点制大黄鱼筛选型芯片，用低温敏感群体和耐低温群体为材料，以Pst I/Alu I、Pst I/Ban II、Pst I/Bsp1286I、Pst I/BstN I、Pst I/HaeIII、Pst I/Rsa I、Pst I/Taq I七种降低基因组复杂度的方法制备杂交样品，计算七种降低基因组复杂度方法的多态性率，分别为6.52%、9.66%、8.00%、10.14%、7.12%、17.49%、12.80%。重新点制筛选型芯片，选择多态性率最高(17.49%)的Pst I/Rsa I方法进行后续探针筛选，利用模糊C-均值聚类分析法(模糊度为1.5)及ANOVA获得0或1标记矩阵及散点图，并进行了聚类分析，聚类结果与分离群体一致，从矩阵中筛选获得20个候选多态性片段，作为耐低温相关候选DArT标记。