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利用RAPD技术对来自不同生态环境的40份干用辣椒种质资源进行多态性分析和聚类比较,在DNA水平上研究干用辣椒种质资源的亲缘关系,为干用辣椒杂种优势育种的亲本选配提供理论依据。取得的主要研究结果如下:
1.采用改良的CTAB法从干用辣椒叶片中提取DNA,经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,OD260/OD280比值在1.72-2.0之间,DNA浓度介于190-890ng·μl;结果表明CTAB法提取的DNA条带完整,无降解,可以用于RAPD分析。
2.试验对反应体系中5个重要因子进行了正交试验,筛选出最优的反应体系,并在此基础上对退火温度与循环次数进行单因素试验,从而确定了一套最佳的干用辣椒RAPD反应体系和扩增程序,即反应体系(25μl)为:PCR染料2.0μl,MgCl22.0mmoI·L-1,dNTPs0.6 mmol·L-1,引物0.5μmol·L-1,DNA模板125ng,Taq酶1.25U,超纯水14.9μl:扩增程序为:94℃预变性4 min,40个PCR循环94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸1 min,72℃复延伸5 min,4℃保存。
3.从200条随机引物中选择了扩增效果最好的11个引物进行聚类分析,扩增出了115条DNA条带,平均每个引物10.4条,其中101条条带具有多态性,多态性比率高达87.8%,每个引物可扩增出7-11条多态性带,平均每个引物9.18条多态性带。
4.根据Jaccard公式建立了遗传距离矩阵图与亲缘关系树状图:对40个干用辣椒种质资源进行遗传关系比较和类别划分:当遗传距离为0.46处可以分为八类:第一类:干红8号:第二类:火箭;第三类:DLXHT-1号、9801大王代替品种;第四类:K-503;第五类:金富贵、红日、谷雨PE-700-x、谷雨神州行、京椒2、谷雨PE-706、谷雨PE-707、京椒1、谷雨PE-705、谷雨PE-704、K-500、红峰、美国铁皮椒、一品红、谷雨PE-703、谷雨PE-702、红塔、谷雨PE-701、朝天椒、大王;第六类:折天红;第七类:早吉红、德龙金塔、统一、早红、XKYH-3号、强势丰塔:京椒4、大酱:XYD-2号、益都红、清引7号:第八类:吉早红、干红、特大牛角椒。