苹果抗白粉病转录因子MdERF100克隆与功能研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:martingale
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苹果是当今世界上栽培面积最广的水果,但由于气候、苹果种植地理位置等原因,往往会受到各类逆境胁迫,以白粉病为代表的真菌侵染较为常见。白粉病对苹果的花、果实等均有影响,对叶片的侵害最为明显,受到病原菌入侵的叶片上覆盖有白色菌丝,严重时导致树梢干枯,继而减少收益。前期转录组结果表明,富集程度较高的是AP2/ERF家族基因,本研究根据此分析结果,筛选得到在白粉菌侵染后差异表达基因Md ERF100。从‘嘎拉’和‘瑞阳’苹果叶片中克隆出Md ERF100基因,利用q RT-PCR法分析Md ERF100基因在两个品种中的表达情况,选择抗病的‘嘎拉’苹果材料中进行研究,具体分析‘嘎拉’苹果的抗病功能。获得的主要结果如下:1.通过对Md ERF100蛋白理化性质的分析,结果显示,该蛋白一共编码276个氨基酸,分子量为29.607 KD,等电点为8.45。在SMART网站上分析得知Md ERF100基因有一个AP2保守结构域。2.采用q RT-PCR进行基因表达分析,在‘瑞阳’和‘嘎拉’中,在接种处理不同时间点表达都有所变化,在‘嘎拉’中6、12、48和72 h差异明显,结果说明Md ERF100基因在苹果抵御白粉病入侵过程中可能起重要作用。3.构建过表达载体,转化拟南芥,选择3个转基因株系接种白粉病病原菌,发现Md ERF100转基因过表达株系对白粉病的抗性增强。通过对接种白粉病处理后Md ERF100下游胁迫相关基因的表达分析发现,水杨酸(Salicylic acid,SA)信号传导途径相关基因At EDS1、At NPR1、At PR2与At PR5的表达水平与野生型均有显著差异,茉莉酸(jasmonic acid,JA)信号传导途径相关基因At PDF1.2和At PR3,在转基因株系中的表达水平也均呈现明显变化,推测Md ERF100基因抗白粉病可能是通过参与SA与JA的信号途径进行的。4.亚细胞定位试验说明转录因子Md ERF100定位在细胞核,酵母自激活试验表明Md ERF100具有转录自激活活性,但能被200 ng/ml金担子素A(Aureobasidin A,Ab A)抑制。
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