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第一部分吗啡预处理延迟相对大鼠心肌的保护作用目的观察吗啡预处理延迟相对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法健康雄性成年Sprague-Dawley大鼠60只,随机分成4组。S组：假手术组,仅开胸并分离冠状动脉左前降支(LAD),不阻断血流150分钟；IR组：缺血再灌注组,静脉给予生理盐水(1.0 ml/kg iv),24h后建立心肌缺血再灌注模型；M组：吗啡预处理组,予以静脉注射吗啡0.3mg/kg,给药后24h建立缺血再灌注模型；D组：吗啡预处理+线粒体KATP通道阻断剂(5-羟葵酸,5-HD)组,缺血前15min静脉注射5-HD (10mg/Kg),其它同M组处理。心肌缺血再灌注模型采用阻断LAD30min后再灌注2h的方法。再灌注结束后测心梗面积,电镜观察各组心肌细胞超微结构变化,整个手术过程中监测血流动力学变化,包括心率、左心室舒张末期压、左心室收缩末期压等。结果1.心肌梗死面积变化：与IR组(37.87±5.92)比,M组(23.78±4.82)心肌梗死面积减小(P<0.05),D组取消吗啡的保护作用(39.62±5.18,与M组比较,P<0005),但与IR组无明显差异(P>0.05)。2.心肌超微结构变化：与IR组比,M组心肌细胞损伤程度减轻,D组无明显差异。3.血流动力学变化：与IR组比,M组心功能改善(P<0.05),D组无明显差异(P>0.05)。结论吗啡预处理延迟相通过线粒体KATP通道介导,对大鼠缺血再灌注心肌具有保护作用。第二部分大鼠心肌线粒体的分离及其蛋白质的提取目的获取大鼠心肌组织纯化线粒体,并验证其纯度。方法以Nycodenz密度梯度离心法获取大鼠心肌组织纯化线粒体,并以Western blot法验证其纯度。结果提纯了大鼠心肌线粒体,并以Western blot法证实了大鼠线粒体的纯度与富集程度。结论获取了大鼠心肌组织纯化线粒体第三部分吗啡预处理延迟相对大鼠心肌线粒体蛋白质组的影响目的采用蛋白质组学技术探讨吗啡预处理延迟相对大鼠心肌保护作用的分子机制。方法用双向凝胶电泳法分离缺血再灌注组(IR组)和吗啡预处理组(M组)的大鼠心肌线粒体蛋白质,对双向凝胶电泳(2-DE)图谱分析后找出表达差异的蛋白质,并用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质。结果经双向凝胶电泳图谱分析发现,IR组的蛋白质点数平均为634±13,M组的蛋白点数平均为651±17。其中差异明显的点有30个,经过质谱分析,初步鉴定出12个蛋白质。这些蛋白质包括能量代谢相关蛋白(ATP合酶p链、翻译延伸因子Tu)、抗氧化相关蛋白(细胞色素C氧化酶、过氧化物酶体增殖物激活受体Y)、呼吸链相关蛋白(电子转移黄素蛋白β亚单位,NADH脱氢酶)及线粒体膜通道相关蛋白(电压依赖性阴离子通道,线粒体转入内膜易位酶亚单位Tim9)。结论吗啡延迟预处理后心肌组织的蛋白表达发生改变,提示吗啡延迟预处理的心肌保护作用可能与改善能量代谢、抗氧化反应等有关。第四部分吗啡预处理延迟相对大鼠心肌NADH脱氢酶表达的影响目的探讨吗啡预处理延迟相对大鼠心肌缺血再灌注时NHDH脱氢酶表达的影响。方法健康雄性成年Sprague-Dawley大鼠40只,随机分成4组。S组：假手术组,仅开胸并分离冠状动脉左前降支(LAD),不阻断血流150分钟；IR组：缺血再灌注组,静脉给予生理盐水(1.0 ml/kg iv),24h后建立心肌缺血再灌注模型；M组：吗啡预处理组,予以静脉注射吗啡0.3mg/kg,给药后24h建立缺血再灌注模型；D组：吗啡预处理±线粒体KATP通道阻断剂(5-羟葵酸,5-HD)组,缺血前15min静脉注射5-HD (10mg/Kg),其它同M组处理。心肌缺血再灌注模型采用阻断LAD30min后再灌注2h的方法。再灌注结束后测心肌NHDA脱氢酶的表达和心梗面积。结果1.心肌梗死面积变化：与IR组(37-87±5.92)比,M组(23.78±4.82)心肌梗死面积减小(P<0.05),D组(39.62±5.18)无明显差异(P>0.05)。2.NHDA脱氢酶表达变化：与S组比,IR组、M组和D组NHDA脱氢酶均下降(P<0.05),与IR组比,M组NHDA脱氢酶增高(P<0.05),D组无明显差异(P>0.05)。结论吗啡预处理延迟相对大鼠心肌的保护作用可能与上调心肌NHDA脱氢酶表达有关。