金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)作为一种条件性致病菌,是引起奶牛乳腺炎的主要病原体之一。目前还没有有效的的疫苗进行预防,抗生素仍是临床上预防和治疗金葡菌的唯一手段。金葡菌具有多种不同耐药机制,可以对不同的抗菌药物产生耐药性。由于抗生素的不规范使用,金葡菌的多重耐药现象日益严重,给临床上治疗金葡菌感染性疾病带来了很大困难。所以掌握金葡菌的耐药特性,并了解其携带的耐药基因与毒力基因特征,对金葡菌的防治工作具有重要意义。本研究从辽宁某牛场的临床型乳腺炎奶牛病例的乳样品中,分离出4株金黄色葡萄球菌。对4株分离株进行了纯化、鉴定、药敏试验,并对其携带的耐药基因与毒力基因进行分析,为该牛场实践生产中奶牛乳腺炎的合理防治提供实验基础。本研究从患临床型乳腺炎的奶牛乳样中分离培养病原菌,并通过生化鉴定以及分子生物学鉴定获得纯种金葡菌分离株。在耐药表型的检测中,采用了纸片扩散法测试分离株对兽医临床上常用的12种药物的敏感性。结果表明,分离株对阿奇霉素、四环素和林可霉素的耐药性最强,对阿莫西林、左氧氟沙星的敏感性最强。整体来说氨基糖苷类与喹诺酮类药物的抑菌效果最为明显。在多药耐药方面,4株分离株均对3种以上的抗生素表现出耐药性。N2-1株同时对7种抗生素耐药,N2-2株与N3株对4种抗生素耐药,最少的N1株也对3种抗生素耐药,多重耐药现象较为严重。对4株金葡菌分离株的7个耐药基因进行了常规PCR检测。结果显示,检测到了大环内酯类耐药基因erm B与四环素类耐药基因tet M。其中N2-1株检测到携带tet M基因,N2-2株携带erm B基因,N3株同时携带tet M与erm B两个基因。四环素类药物的耐药表型检出率高于tet M基因的阳性率;药敏试验中较高的红霉素耐药表型检出率,与erm B耐药基因的阳性率一致。在毒力基因的检测方面,为确定其毒力模式,采用PCR技术对4株金葡菌分离株的7个毒力基因进行了检测,包括肠毒素(SE)、中毒性休克综合征毒素(TSST)、溶血素(HL)、杀白细胞介素(PVL)和表皮脱落毒素(ET)等。结果表明,4株分离株均携带毒力基因。其中N1株与N3株同时检测出了编码溶血性毒素的hla与hlb两个毒力基因,N2-1株检测出hla毒力基因,N2-2株检测出hlb毒力基因。其他毒力基因sea、seb、eta、pvl、tsst未检测出。在动物感染实验中,攻毒组小鼠均出现了不同程度的临床症状。经病理学检查发现,小鼠乳腺组织结构被破坏明显,存在炎性细胞浸润等病理损害,其他脏器未出现明显病变。病原学检测结果表明,导致该牛场发生乳腺炎的主要病原菌为携带tet M、erm B两个耐药基因和hla与hlb两个毒力基因的金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,氨基糖苷类与喹诺酮类药物对其敏感,可选用上述药物开展临床治疗工作。