目的:建立可同时检测水中副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）、小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)、志贺氏菌(Shigella)的多重降落PCR检测方法，并研制其检测试剂盒。　　方法:针对副溶血性弧菌VP1332基因、小肠结肠炎耶尔森菌inv基因、志贺氏菌ipaH基因为靶标，分别设计3对特异性引物。应用Primer-BLAST检测引物特异性;并根据所设计引物建立对应的单一降落PCR，在此基础上进一步建立多重降落PCR，检测临床常见的其他14株标准菌株的基因DNA以判定VP1332、inv、ipaH三种基因的特异性;并通过对不同稀释度的目的菌株基因组DNA的检测以判定该法的灵敏度，最终确立反应体系的特异性与灵敏度。在优化后的检测体系和检测条件基础上，研制水中病原菌多重降落PCR检测试剂盒。将该试剂盒应用于水中病原菌检测，同时与常规培养鉴定结果比较。　　结果:　　1.单一降落PCR特异性:所确立的副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌单一降落PCR扩增产物结果，于870 bp、393bp、193 bp处扩增出相应特异性条带，PCR产物大小均与目的片段一致，没有非特异性条带出现，而其他菌株均为阴性，与其他菌株之间无交叉反应。　　2.单一降落PCR灵敏度:所确立的副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌、单一降落PCR相应的检测下限分别为0.075pg/μL、0.07ng/μL、0.05 pg/μL。　　3.在单一降落PCR的基础上成功摸索出可同时检测针对副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌的多重降落PCR反应体系和循环参数，建立了多重降落PCR检测方法。　　4.多重降落PCR检测体系的特异性:该方法能针对副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌扩增出相应的870 bp、393 bp、193 bp特异性目的条带。　　5.多重降落PCR检测体系的灵敏度:所确立的多重降落PCR检测体系对副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌的检测下限分别为0.005ng/μL、0.05ng/μL、0.005ng/μL。　　6.成功研制了多重降落PCR试剂盒检测水中病原菌。该试剂盒能有效地检测出水中副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌单一感染及随机组合后的混合感染，能有效检测出不同种水样标本中的病原菌，且与传统分离检测结果一致。　　结论:成功建立了可于单管中同时检测水样中副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、志贺氏菌的多重降落PCR检测方法，该方法具有高灵敏度、高特异性和可重复性，在此基础上研制的多重降落PCR检测试剂盒，可用于水样中病原菌的快速诊断及大规模流行病学研究。