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本论文首先确定了GABA的测定方法,即用纸层析法定性分析GABA,纸层析-比色法定量分析GABA,并将测定结果与氨基酸自动分析仪的测定结果作比较得知,本研究确定的GABA测定方法可靠,准确度高,可用作常规检验食品、发酵液中的GABA含量。制作了GABA含量与吸光度值的关系曲线,即GABA标准曲线,为常规检验样品中的GABA含量提供了可靠的实验依据。确定了纸层析分析方法中展层系统和显色系统的组成,展层剂组分中V(正丁醇):V(醋酸):V(水)=4:3:5为最优比例,显色剂浓度为lg/dL较为合适,此时纸层析结果显示谷氨酸与γ-氨基丁酸Rf值之差最大,即分离效果最好;对显色时间及温度进行探讨,发现当温度为85℃,显色时间为10min时,实验效果最明显;并对样品重复性试验、加标回收率等进行了分析,试验结果显示纸层析-比色法定量GABA的试验方案重复性较好,相对标准偏差仅为0.96﹪,加标回收试验的平均回收率为97.2﹪,说明此法测定几乎不受基体的干扰,方法具有较高的可靠性,对后续研究工作奠定了坚实的基础。
以山东轻工业学院食品与生物工程学院保藏菌种植物乳杆菌1.11、乳酸链球菌乳酸亚种1.0018、嗜酸乳杆菌La、保加利亚乳杆菌Lb、嗜热链球菌Str:购于中科院微生物菌种保藏中心的乳酸链球菌1.1690、发酵乳杆菌1.1880、乳酸链球菌1.1936;以及分离自威海兰陵味精厂生产车间附近土壤中的细菌’W<,1>、W<,2>、W<,3>等菌株为出发菌种,采用透明圈平板法筛选、高酸高渗法筛选以及三角瓶发酵复筛相结合的办法,提高了获得高产菌株的机率,从而最终获得-株γ-氨基丁酸高产菌株乳酸链球菌乳酸亚种1.0018。
通过研究碳源、氮源、碳氮源比例、发酵温度、发酵初始pH、接种量等多种因素对乳酸链球菌乳酸亚种1.0018产GABA发酵条件的影响,我们初步掌握了比较优化的发酵条件。根据实验结果我们得到优化的培养基组成为:葡萄糖1.5﹪、酵母膏1.0﹪、蛋白胨1.5﹪、乙酸钠0.2﹪、Glu 1.5﹪、MgSO<,4>·7H<,2>O 20mg/kg、MnSO<,4>·4H<,2>Olmg/kg、NaCl lmg/kg、FeSO<,4>·7H<,2>Olmg/kg,pH6.8。验证实验的结果表明乳酸链球菌乳酸亚种1.0018在优化后的发酵培养基中培养16h后,发酵液中的GABA含量达到2.7mg/mL,是最初筛选培养基(0.68mg/L)的4倍。