前言 胃癌切除术后复发病例中腹膜转移最多，弥漫性分布的腹膜转移癌结节，不适合手术切除和放射治疗，常规化疗效果也不理想。近几年开展了经腹腔注射BMRs的免疫疗法。研究表明乳斑与胃癌腹膜转移有关，是胃癌腹膜转移早期的侵入位点。乳斑(milky spots)主要位于腹腔大网膜，是腹膜间皮下的淋巴样组织，主要成分是巨噬细胞，进入乳斑的胃癌细胞因静止状态的巨噬细胞杀瘤能力很弱，而能发展成为实体瘤。激活乳斑巨噬细胞，提高其杀灭癌细胞的能力，使早期进入乳斑的微量癌细胞不能存活，有助于防治胃癌腹膜转移。国外已进行了这方面的探索，Shimotsuma等将OK-432注射到大鼠腹膜腔，激活大网膜乳斑，使乳斑及巨噬细胞的数量增多，形态改变。Koenen通过腹腔内使用GM-CSF既能增强乳斑巨噬细胞抗肿瘤的活性，又能增加乳斑巨噬细胞的数量。国内腹腔注射BMRs激活乳斑的研究报道较少。 寻找或开发有效的BMRs，激活、调变巨噬细胞的功能，发挥其在抗肿瘤免疫中的积极作用，是当前肿瘤免疫治疗中的重要课题。乳斑内有大量的巨噬细胞，在肿瘤入侵早期，巨噬细胞杀伤癌细胞的效靶比例是充分的，此时选择毒付作用轻的BMRs，激活巨噬细胞，发挥其杀伤肿瘤细胞的功能是本课题的主要目标。本研究通过腹腔注射INF-γ、高聚生及新城疫病毒，旨在了解它们是否能有效激活乳斑及腹腔巨噬细胞、杀伤胃癌细胞，为防治胃癌腹膜转移奠定实验基础。 实验材料 实验动物：昆明小鼠，雌性，8-10周龄，体重约26克，实验室标准环境饲养。 癌细胞：人胃癌细胞株SGC－7901。 试剂：干扰素一Y，高聚生，新城疫病毒L系（NDV－L人LPS，活性炭悬液，RPMI 1640，TRlzol试剂，反转录试剂盒，Taq DNA聚合酶，Rsa限制性内切酶，PCR产物纯化试剂盒，凝胶提取试剂盒，质粒机M试剂，DMSO试剂等。 仪器：外科手术常规器械，数码照相机，彩色病理图文分析系统，细胞培养箱，紫外分光光度仪，PCR仪，水平电泳仪，凝胶成像仪，空气摇床，酶标仪，荧光定量PCR仪，扫描电镜等。 实验 内 容 实验方法共分三个实验部分 动物分组：实验小鼠分成4组。实验组：I门FN－Y）组：每次腹腔注射ZInl，含 IFN－YI万 11。G（高聚生）组：每次腹腔注射高聚生注射液Znil，含高聚生500if。N（NDV－L）组：每次腹腔注射ZInl，含 NDV－L 50HU。对照组为P刁BS）组：每次腹腔注射PBS Znd。隔天一次，共2次，第4天处死动物取材。 统计学分析：单因素方差分析，Q检验。 实验一 大网膜乳斑及乳斑巨噬细胞的激活 实验方法 1．用活性炭染色法测定乳斑量的改变 为了了解腹腔注射PBS对研究结果的影响，本实验设一组未经任何处理的小鼠C组k）作阴性对照。C组5只J组5只J组6只人组6只J组6只。小鼠处死前20min，腹腔注射活性炭悬液0．snil。剖腹后完整切除大网膜，在白色光滑塑料板上展平，大网膜旁置一把标准刻度尺，用数字照相机近距离拍摄照片。用计算机软件辅助求得：k）计算每平方厘米内乳斑的个数，汕）单个乳斑的平均面积及k）每平方厘米内乳斑总体所占面积。 ·2· 2．用非特异性脂酶染色法检测乳斑巨噬细胞数量的改变 P组5只／组5只人组6只J组6只。处死动物，切除大网膜制成4nun组织切片，常规方法行非特异性脂酶染色。比较四组乳斑内染色阳性的巨噬细胞数量。 实验结果 1．用活性炭染色法测定乳斑量的改变 5组小鼠乳斑个数由多到少依次为1组（组J组J组，及C组。5组间存在极显著差异仔值为5．904，P＜0．0门，两两对比组间均数，发现C组与P组差异不显著（P＞0．05人互组与任何组间均存在极显著差异（P＜o．0门人组与N组两组间无显著差异瞩＞0．05人G组与N组钢与P组相比，均未见显著差异u＞队05）。 5组小鼠乳斑平均面积由多到少依次为1组下组J组J组，及C组，5组间存在极显著差异7值为14．597，P＜O．01人两两对比组间均数，发现C组与P组间无显著差异口＞0．05人1组人组J组与P组间存在极显著差异河＜0．0门，1组下组与N组三组分别行两两相比均未见显著差异（P＞o．05）。 5组小鼠每平方厘米大网膜乳斑总体所占面积由多到少依次为1组人组J组J组，及 C组。5组间存在极显著差异y值为 17．115，P＜0．0X两两对比组间均数，发现 C组与 F‘组间无显著差异（P＞0．05厂 I组、G组。N组与P组间均存在极显著差异门＜0．OI入1组与G组及N组分别两两相比均见极显著差异口＜0．01人G组与N组相比无显著差异口＞O．05人 总之，腹腔注射INF－Y，高聚生，NDV均可使大网膜乳斑量增加，INF－Y效果最明显，PBS对结果影响不大。 2．用非特异性脂酶染色法检测乳斑巨噬细胞数量的改变 4组小鼠单位面积乳斑内巨噬细胞个数由多到少依次为1组人组J组、P组。4组间存在极显著差异厂值为 14．33