蝗绿僵菌(Metarhizium acridum)是一类十分重要的模式真菌。在真菌中,肽酶在影响真菌适应性方面发挥着重要的作用,而二肽酶(dipeptidase)的功能研究仍然少见。二肽酶能够将二肽水解形成两个游离的氨基酸,对生物体糖代谢及氨基酸代谢具有十分重要的意义。目前,C69家族二肽酶dipeptidase(PepD)在真菌中功能尚未见报道。因此,本文以昆虫病原真菌蝗绿僵菌为研究对象,分析了其酶学特性,阐明了该二肽酶基因(MaPepD)在蝗绿僵菌中的功能,并对该基因参与调控相关表型的机制进行了探索。主要获得了以下研究结果:(1)大肠杆菌(Escherichia coli)表达获得MaPepD蛋白,该蛋白分子量为56-kDa,酶活性为240 U/mg,K_m为1640 mM。该二肽酶最适pH 6.0最适温度是55°C。(2)缺失MaPepD基因后,分生孢子在1/4 SDAY培养基上萌发率提高,对紫外、湿热、细胞壁破坏剂抗性增加,但菌株毒力不受影响。(3)收集1/4 SDAY培养基上培养3 d的孢子进行RNA-Seq分析,结果表明:MaPepD可能介导了细胞壁合成、氧化应激、DNA修复相关基因的转录以影响正常产孢孢子的抗逆性。(4)二肽酶基因MaPepD缺失后,菌株在SYA培养基上的产孢模式发生转变:由微循环产孢转变为正常产孢。(5)氨基酸代谢组学分析表明:MaPepD突变体(ΔMaPepD)中有19种氨基酸(包括其衍生物)的含量水平发生了显著变化;当外源添加4 mMβ-Ala水溶液于SYA培养基中,敲除菌株由正常产孢回复为微循环产孢。(6)收集SYA培养基培养12 h的菌丝进行RNA-Seq分析,结果表明:MaPepD可能介导了孢子萌发、菌丝生长、产孢、氨基酸代谢等相关基因的转录以调控微循环产孢转换。实验结果表明:MaPepD具有较高二肽酶活性,MaPepD缺失后,在SYA培养基上产孢模式发生转换,一些氨基酸的含量水平发生变化。在1/4 SDAY培养基上,蝗绿僵菌分生孢子的萌发率提高、酶活性降低、抗紫外和抗湿热能力极显著增加。