论文部分内容阅读
为了研究枇杷耐受低温的分子机理,以早熟易受冻害的早钟六号幼果为研究对象,利用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,对枇杷在低温胁迫下的基因表达情况进行研究。对SDS法进行改良,探索出快速、高效的提取枇杷幼果总RNA的方法,采用此方法提取的RNA适合mRNA差异显示分析。通过优化试验,建立了适合枇杷幼果低温胁迫下DDRT-PCR分析的最佳体系,在20μl体系中,确定了各组分为:模板cDNA 1.0μl,锚定引物0.5μM,随机引物0.5μM,dNTPs 50μM,10×PCR buffer 2μl,Taq酶1U,退火温度40℃。在此基础上对枇杷幼果在0℃低温胁迫6h下mRNA的变化进行分析,共分离到19条差异表达的基因片段,经Reverse Northern杂交获得了4个阳性的枇杷低温诱导相关基因片段(编号为CSIGE 1~4—Cold Stress Induced Genes in Eriobotrya japonica 1~4)。对4个阳性差异片段进行测序,序列已提交GenBank,CSIGE 1~4登录号依次为GT617703、GT617704、GT617705和GT617706。序列相似性分析表明:①CSIGE 1序列与Homo sapiens chromosome 8 clone Rp11-420F14 map p21-p11有高度同源性,是抗低温胁迫基因,这说明植物与动物基因组具有某些共同的编码序列,可能在基因表达方面具有一些共同的机制;②CSIGE 2与蓖麻乙醇脱氢酶(ADH)、拟南芥NADP依赖型氧化还原酶、大豆受水杨酸胁迫诱导相关基因等有不同程度的同源性,CSIGE 3与葡萄和黄瓜受逆境胁迫的EST有部分同源,该基因表达量的调节对枇杷响应低温逆境起到某种作用;③CSIGE 4序列未搜索到与任何基因有相似性,可能为新基因。