核糖体相关蛋白ECP参与果蝇学习记忆的初步研究

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ecp是从野生型黑腹果蝇胚胎cDNA文库中筛选并克隆得到的一个新基因,生物信息学分析及本实验室蔗糖密度梯度离心分离核糖体结合Western blowing分析表明ECP可以和核糖体的40S小亚基及60S大亚基共沉降,提示ECP是一个核糖体相关蛋白,可能参与蛋白质合成的起始过程。ECP在果蝇组织中持续广泛地表达,没有明显的组织特异性。过表达ecp无明显可观测的表型。2003年Josh Dubnau等发现一株P因子插入在eIF5C/ecp的突变体果蝇C0150存在长期记忆的缺失,而与我们得到的ecp的突变体果蝇11581表型不同。所以到目前为止,果蝇中ecp的具体功能还不是很清楚,ecp是否参与长=期记忆的形成及其可能的分子机制尚有待进一步的研究。 为进一步分析ecp在体的功能,我们首先用PCR对ecp的两株突变体果蝇11581、C0150的P因子插入位点进行验证,对这两株果蝇的ECP表达水平进行检测,并对其表型进行初步分析:其次,我们利用P因子的非精确剪切技术制备ecp完全缺失的突变体果蝇,并对其表型进行初步分析;此外,为研究ecp是否参与果蝇长期记忆的形成,我们通过免疫荧光染色分析了ecp在幼虫及成虫的中枢神经系统的表达情况。 实验结果表明:突变体果蝇11581和C0150中P因子均插在ecp第一个内含子区,分别插在距起始密码子ATG上游859bp和1297bp的位置,其纯合子中ECP表达均下降:对他们的表型分析发现11581纯合子具有半致死、刚毛变短、翅膀变小等核糖体蛋白突变所致的minute表型;获得一株ecp完全缺失的突变体果蝇63/TM6B,western blotting和遗传学的互补实验均证明了ecp的完全缺失,其纯合子存在蛹前期致死、生长发育迟缓等表型。幼虫及成虫脑袋的免疫荧光染色结果表明ecp在整个中枢神经系统均有表达,果蝇的嗅觉学习记忆中枢蘑菇体的发育无明显异常的缺陷。为对其突变体果蝇长期记忆能力进行检测,我们初步建立了果蝇成虫嗅觉联想式长期记忆检测系统。
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