【摘 要】
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蛋白质糖基化在许多生物和生理过程中发挥着重要的作用,进行蛋白质糖基化的分析在蛋白质组学以及药物筛选的研究中具有重要的意义.本论文分别以寡糖链、糖肽以及整个糖蛋白(
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蛋白质糖基化在许多生物和生理过程中发挥着重要的作用,进行蛋白质糖基化的分析在蛋白质组学以及药物筛选的研究中具有重要的意义.本论文分别以寡糖链、糖肽以及整个糖蛋白(糖形)为分析对象,进行以微流控芯片和质谱或者二者联用为基础的 N-连接蛋白质糖基化分析平台和方法的研究.主要内容包括:
在微流控芯片上实现了简单糖的快速电泳分离和直接、间接激光诱导荧光检测;发展了以芯片电泳与外切糖苷酶酶解结合,激光诱导荧光检测为基础,以糖肽为分析对象的糖链结构类型分析方法,对火鸡卵白蛋白的糖链结构进行推测,结果表明该蛋白含有高甘露糖型和杂合型的糖链;设计并制备了一种集成化凝集素亲和微流控芯片.在通道内构建以整体材料为载体的微米级的凝集素亲和柱,以电渗流为驱动力,在微流控芯片上实现了传统凝集素亲和色谱的全过程,用豌豆凝集素亲和芯片对糖蛋白的糖形进行分析,根据其糖链与豌豆凝集素结合能力的不同将糖形分为与该凝集素不结合、弱结合和强结合的组分.该芯片具有耗样量少、分析快速以及操作简单的优点.
构建了联接芯片电泳和质谱的鞘流液辅助的纳米电喷雾接口.用该接口将芯片电泳与离子阱质谱连接,实现了糖蛋白中糖肽结构的具体分析;建立了用基质辅助激光解吸-时间飞行-质谱(MALDI-TOF-MS)对从糖蛋白释放下来的糖链进行结构分析的方法,用该方法进行了不同来源的同种糖蛋白,鸡卵白蛋白和火鸡卵白蛋白糖链结构的比较分析.
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