背景与目的:胰腺癌是世界公认的恶性程度最高的肿瘤之一,其中95%的胰腺癌是胰腺导管癌。在过去的几十年里,随着技术的进步,癌症的治疗一直在发展,但是大多数胰腺癌患者的生存期却并没有得到明显改善。目前根治性手术切除仍然是胰腺癌的主要治疗手段,极大的改善患者的预后。但是,大部分患者因其起病隐匿,早期症状不典型等特性,导致首诊时已肿瘤进展,因此胰腺癌的手术切除率只有15%-20%。同时,影响胰腺癌预后的分子机制目前尚有待进一步研究。因此,筛选与胰腺癌预后相关的生物标志物,有助于为临床上治疗胰腺癌提供切实可靠的理论依据,从而改善胰腺癌患者的生存预后。microRNA是一种存在于真核生物体内高度保守的、非编码的,长度约为20-24bp的核苷酸序列。目前已知的人类microRNA约有2600余种,在不同的病理或生理情况下,不同的microRNA的表达水平出现差异。有大量的研究证实,在肿瘤的发生和发展过程中,microRNA在不同的阶段发挥着某种特定的作用,从而促进/抑制肿瘤的进程。microRNA作为新的抑癌基因或致癌基因,已经逐渐的得到了医学界的公认。通过基因表达谱芯片分析结果发现,在不同的生长阶段,不同的疾病,甚至不同的细胞内,各microRNA的表达都具有一定的特异性。即这些特异性的表达,既是其功能研究的基础,又可以在临床上作为诊断和治疗肿瘤的生物标记物。由此,研究不同预后胰腺癌患者中各microRNA的表达量的变化,对胰腺癌的治疗具有很重要的潜在价值。内容与方法:收集了生存期大于三十个月和小于十二个月的胰腺导管癌患者标本各3例,行基因表达谱芯片检测。从中筛选出fold change变化较大的microRNA,然后通过查阅文献的方式,筛选出与胰腺癌潜在相关的10个microRNA。另外收集整理了预后资料完整的胰腺导管癌患者冻存标本68例,通过q-PCR的方法检测样本中上述10种microRNA的表达水平,通过分析microRNA表达量与患者生存的相关性,筛选并获得与胰腺癌患者预后最为相关的microRNA。应用生物信息学手段,对其潜在功能及靶基因进行预测,以胰腺癌细胞系Panc-1和Bxpc-3为对象,分别过表达相关microRNA,检测细胞凋亡、细胞周期,侵袭和浸润能力的变化;最后,通过luciferase assay检验microRNA与其潜在靶点间的结合能力并通过Rescue实验进一步验证实验结果。结果:(1)通过基因表达谱芯片检测,并结合文献回顾,发现在2组不同预后胰腺导管癌患样本中,miR-21,miR-106b,miR-186,miR-192,miR-221,miR-409-3p,miR-409-5p,miR-492,miR-573,miR-608这10个表达差异最为明显的,且与胰腺癌相关的microRNA。(2)通过在68例胰腺导管癌患者样本的进一步验证,发现miR-608表达水平与胰腺导管癌生存期呈负相关,即高表达miR-608的患者预后好于低表达患者。其余microRNA和患者预后未见明显统计学差异。(3)通过生物信息学预测miR-608的潜在功能及靶基因,发现其可能与细胞凋亡及BRD4表达相关。(4)在Panc-1和Bxpc-3细胞中过表达miR-608,发现细胞的凋亡明显增多;双荧光素酶报告基因确认BRD4是miR-608的靶分子之一;过表达miR-608后凋亡增加,同时过表达miR-608和BRD4以后,凋亡升高的趋势被部分逆转。结论:在胰腺导管癌中,miR-608可通过靶向沉默BRD4进而抑制细胞凋亡来促进肿瘤的进展,miR-608可能作为一个潜在的预后标志物和靶点。