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阔叶薰衣草(Lanvandula spica)是唇形科(Lamiaceae)薰衣草属(Lanvandula)的多年生草本植物,原产于地中海,耐热、耐湿,全株都能散发出宜人的香味,具有醒目提神、舒缓神经等功效,是薰衣草类较能适应海南高温高湿环境的一种。芳樟醇合酶一般通过植物叶片、花、果实等提取获得,是合成芳樟醇的关键酶,能在亲电机制的条件下将单一底物GPP催化形成单一产物芳樟醇。芳樟醇作为一种天然功能性单萜,是植物精油的主要成分,具有极高的经济价值和药用价值,广泛应用于医药、食品、化妆品和日化等行业。本实验通过对阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因的克隆和序列分析,并构建基因转化载体,为热带园林植物中无香味或者香味较淡的物种进行定向遗传改良、培育出色、香、形俱全的优良转基因植物品种奠定基础。主要研究结果如下:1、根据芳樟醇合酶同源序列设计出特异性引物,通过RT-PCR技术,成功从阔叶薰衣草叶片中克隆出芳樟醇合酶基因,其cDNA序列全长为1809bp,编码602个氨基酸,具有完整的开放读码框。2、将克隆得到的阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因与其他芳樟醇合酶基因进行蛋白质序列比对,该序列具有单萜类合酶的所有保守氨基酸功能序列,包括DDXXD以及5端的RR功能基团和(N, D)D(L, I, V)X(S, T)XXXE等高度保守功能域,属于芳樟醇合酶家族。Lslis和Lllis的蛋白二级结构预测结果表明,两者在整体结构上基本保持一致,但Lslis相对于Lllis要少一个α螺旋结构。因此将阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因命名为Lslis。3、利用植物双元表达载体pCAMBIA1303的CaMV35S启动子和NOS终止子可构成完整表达框的原理,将Lslis的片段插入到pCAMBIA1303载体中,成功构建了植物表达载体。再通过电转法将重组表达载体导入农杆菌LBA4404中,为进一步的Lslis转化植物中的遗传表达研究奠定良好的基础。