基于磁珠式光微流激光ELISA的研究

来源 :太原理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xiexia1987623
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酶联免疫吸附试验(ELISA)是利用抗原抗体的特异性结合,通过酶对底物催化的显色反应,然后来定性或定量的检测生物标记物的一种方法,常用在各种疾病的早期诊断中。但是癌症、艾滋病等疾病的病原在人体血液中的浓度极低,抗原抗体的反应极其缓慢,用荧光作为传感信号的传统ELISA法难以实现检测。而基于光微流激光的ELISA是以激光作为传感信号,出射激光的阈值时间为检测信号,从而检测较低生物标记物的浓度。但是,激光阈值时间与ELISA产物中酶的数量成反比关系,进而与生物标记物的浓度成反比关系。所以,当生物标记物的浓度较低时,则出射激光的阈值时间就会较长,给整个操作带来了极大的不便。于是,我们提出了基于磁珠式的光微流激光ELISA。首先用玻璃作为固相载体进行了ELISA研究,分析得出经过表面改性的玻璃可以更好地吸附生物分子,且可以做到玻璃改性再处理可以重复使用的效果,即证明表面包覆二氧化硅的磁珠作为固相载体具有可行性。利用微加工技术制备了高品质的平凹型法布里-珀罗(FP)光学微腔作为谐振腔,在具有FP光学微腔的芯片中研究了磁珠对出射激光的影响,加入磁珠使得出射激光的最低泵浦能量增大、阈值(能量密度)增大,这些现象都是对实验结果不利的影响。但是在做ELISA实验时,加入磁珠可以更好地吸附生物分子,实现局部荧光增强的效果,加快反应的时间。综合考虑两方面的影响因素,选择最佳的磁珠浓度做光微流激光ELISA实验。最后用磁珠作为固相载体进行了光微流激光ELISA实验,实验中采用人体白细胞介素6(IL-6)作为研究对象,分别对100 pg/mL、10 pg/mL、1 pg/mL、0.1 pg/mL、0.01pg/mL的标准品溶液进行了分析,得出的出射激光阈值时间分别为40min、90 min、120 min、100 min、125 min。相比于未加磁珠的光微流激光ELISA,相同浓度的标准品出射激光的阈值时间分别为:40min、70 min、180 min、300 min、370 min,总体的阈值时间明显降低了很多,且分析物的浓度越低磁珠的作用越明显,达到了预期的实验效果。
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