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本研究以贵州从江香猪为研究对象,在香猪microRNA表达谱测序的基础上,选择其中变化较大的12个microRNA研究,通过miRSystem数据库预测12个miRNA靶基因,Kobas和DAVID数据库分别对预测的靶基因进行GO分析和KEGG分析,找出繁殖相关的7个靶基因,采用RT-qPCR方法检测了12个miRNA及其靶基因在6个不同发育时期的香猪睾丸组织中的发育性变化。 本研究主要内容包括:⑴对543个小RNA的靶基因进行了预测,表达差异变化较大12个miRNA的靶基因富集于MAPK信号通路中,其中12个miRNA预测到2834个基因,经GO和KEGG分析,靶基因富集在3685个GO条目和34个信号通路中,涉及睾丸发育和精子发生等生物学过程中。⑵依据香猪的睾丸组织学变化,将6月龄的香猪睾丸样品分成幼儿期(1月)、青春期(2~3月龄)、性成熟期(4~6月龄)和老龄期(48月龄)4个发育期。⑶采用特异性茎环引物反转录,经qPCR方法检测分析,得到香猪睾丸12个microRNA的发育性表达变化规律:幼儿期起负调控作用的主要小RNA分子是:miR-222-3p、miR-16-5p、let-7f-5p、miR-181b-5p、miR-424-5p、miR-23a-3p、miR-185-5p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-1-3p;青春期起负调控作用的主要miRNA是:miR-449b-5p、let-7f-5p、miR-185-5p、miR-29a-3p、miR-29c-3p、miR-1-3p;性成熟期起负调控作用的主要miRNA是:miR-449b-5p、miR-16-5p、let-7f-5p、miR-140-3p、miR-29c-3p、miR-1-3p;老龄期起负调控作用的主要miRNA是:miR-185-5p、miR-222-3p、miR-29c-3p、miR-1-3p。⑷miR-16-5p、miR-449b-5p的表达量达到最高可以作为香猪达到性成熟的分子标记,miR-222-3p的表达水平达到最高值时提示香猪达到老龄期,可以淘汰。⑸香猪睾丸处于2月和6月龄时,MAPK1、MAP2K1基因的表达水平较高,其余月龄7个功能基因的表达水平较低。⑹miR-449b-5p可能通过MAPK途径影响从幼儿期到性成熟期睾丸的精子生成过程。