【摘 要】
：
为开发新型高效低毒干扰素药物,本课题采用DNA重组技术将野生型绵羊干扰素-τ的26位脯氨酸突变为亮氨酸,在毕赤酵母分泌表达系统中构建和筛选高表达工程菌株并进行高密度发酵；初步建立突变型干扰素-τ的纯化制备方法,制备的纯品测定生物学效价,并在抑制乙型肝炎病毒的药效学模型中进行实验,为开发用于人体治疗的药物奠定基础。在纯化工艺的建立和优化中,从初步纯化,中度纯化和精细纯化三个阶段进行改进：将常规的超滤
论文部分内容阅读
为开发新型高效低毒干扰素药物,本课题采用DNA重组技术将野生型绵羊干扰素-τ的26位脯氨酸突变为亮氨酸,在毕赤酵母分泌表达系统中构建和筛选高表达工程菌株并进行高密度发酵；初步建立突变型干扰素-τ的纯化制备方法,制备的纯品测定生物学效价,并在抑制乙型肝炎病毒的药效学模型中进行实验,为开发用于人体治疗的药物奠定基础。在纯化工艺的建立和优化中,从初步纯化,中度纯化和精细纯化三个阶段进行改进：将常规的超滤脱盐步骤与阳离子交换层析步骤改为疏水层析,使用辛烷基琼脂糖介质并优化盐浓度、pH等选择性因素,解决了原初步纯化工艺中的降解问题；增加Source 30Q阴离子交换层析作为中度纯化步骤,经过对pH、柱床高度、载量、流速等参数进行优化后,分离除去了表达过程中Kex2酶错误切割产生的性质接近的蛋白；通过在分子筛层析平衡液中添加合适浓度的GSH等,解决了高纯度干扰素-τ纯化过程中的自发聚合现象。整个纯化过程的收率为46.4%,得率为260mg干扰素-τ蛋白/L发酵液上清,样品比活为1.55×108IU/mg;经银染法,HPLC和分子筛分析色谱检测蛋白纯度在95%以上,MALTI-TOF质谱分子量测定值与理论值相符,达到了预期的目标。该样品在乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2.2.15细胞中,表现出良好的抗乙型肝炎病毒的作用：对细胞HBeAg的分泌抑制效果与市售干扰素产品罗荛愫?（Interferon a-2a）相当；对细胞内的HBV-DNA水平具有明显的抑制作用,优于罗荛愫?（无抑制作用）。但半数中毒浓度（TC50）是罗荛愫?的75倍,最大无毒浓度（TCo）是罗荛愫?的240倍,充分体现了其高效低毒特性。本课题的研究结果表明突变型绵羊干扰素-τ在毕赤酵母分泌表达系统中的表达和制备较成功,有望开发为高效低毒的抗病毒药物。
其他文献
《表里的生物》（统编语文六年级下册）是冯至先生的一篇回忆性、叙事性文章，讲述了作者小时候一段幼稚可笑的经历。作者当时认为“凡能发出声音的，都是活的生物”，当他听到父亲的怀表发出清脆的声音，就认为里面一定有一个蝉或虫一类的生物。他对此充满好奇，可是父亲不许他动，这又使他很痛苦。有一次，父亲打开表盖让他看，说这摆来摆去的小东西是蝎子尾巴，他信以为真，见人就说父亲有一个小蝎子在表里。课文富有童真童
本文主要讨论了求解非线性规划问题的两种新的方法。这两种方法都是以滤子技术为基础,同时结合优化问题的两种常用算法而得到。第一种方法是在滤子判别准则条件下加入了填充函数求解。填充函数求解过程分为两个阶段,极小化阶段和填充阶段。在本文里首先建立了一个新的填充函数并证明了其填充性质,然后给出了滤子参与下的填充滤子算法,在计算过程中滤子接受那些靠近可行域或者有更好的极小值的迭代点。为了适应填充函数的运算法则
本文通过求解相对论性的Hartree-Fock （RHF）方程,得到了钠原子Rydberg态的结构以及多体微扰计算中所需要的所有虚态波函数。我们对分段的变步长法进行了改进,使得步长可以比较灵活的选取,这既保证了求解得到的钠原子精细结构的精度,又兼顾了计算量。采用给部分虚态加外势的方法,可以获得有限的近似完备的数值基函数,这就避免了在多体问题中需要计算大量虚态的困扰。在此基础上还考虑了电子之间的磁相
图谱理论是图论的一个重要组成部分,它主要包括邻接谱理论、拉普拉斯谱理论、拟拉普拉斯谱理论等。在这些谱中,用拟拉普拉斯谱反映图的性质和结构最为便利。S为图G的一个点子集,若S中任意两点均不相邻,则称S为独立集。独立集的最大基数称为图G的独立数,记为α（G）。若│E（G）│=│V（G）│+1,则称连通图G为双圈图。记阶数为n,独立数为α的双圈图为（?）（n,α）,（?）1（n,α）为（?）（n,α）中
根据《国土资源部、监察部关于严肃查处未报即用违法用地的通知》（国土资发[2009]164号）要求,为严肃查处土地违法违规行为,河南省国土资源厅根据群众举报和各省辖市上报的未报即用违法违规用地,通过核查,筛选出了一批土地违法的典型案件,1月下旬通过新闻媒体公开
本文研究了代数上的Lie高导子,并且分析刻画了这些导子的一些性质。记A为一个代数。A上的线性映射序列D=（Li）i∈N满足Lo=idA.称D为Lie高导子,若对于任意的x,y∈A,以及每个非负整数n∈N,满足我们还证明了若（Ln}为代数A上的Lie高导子且满足L0为A上的恒等映射,那么存在A上的一个Lie导子序列{L’n）使得：上式内部的和取遍所有的rj,并且有
超氧化物歧化酶（superoxide dismutase简称SOD）是一类催化超氧化物阴离子（O2-）歧化反应的金属酶；在人和哺乳动物中有3种：细胞内的Cu,Zn-SOD（SOD1）、线粒体中的Mn-SOD（SOD2）和胞外液含Cu和Zn的EC-SOD （SOD3）。SOD,尤其Cu,Zn-SOD,已广泛应用在防辐射、抗衰老、防治肿瘤等方面,但Cu, Zn-SOD和Mn-SOD体内半衰期短,不能与
随着新课程标准的提出与实施,教师对生活化的教学模式逐渐重视起来。教师以学习内容为基础,结合生活实际进行教学,将知识通俗化,以此提高课堂上的教学效率。本文对生活化教学的重要作用进行了深入探究,主要阐述了当前初中物理课堂教学的现状以及生活化教学在初中物理教学中的运用措施。
本文讨论了一类与年龄相关的带扩散的随机人口系统。第一部分,构造一系列迭代方程序列,利用Bihari不等式和Davis不等式证明了所作的迭代序列在空间I2（0,T；V）∩L2（Ω；C（0,T；H））上有界且收敛。在非Lipschitz条件下,证明了带扩散的随机人口方程解的存在性、唯一性。第二部分,讨论带扩散的随机人口方程解的数值求解方法,在方程的外部环境影响和随机扰动都依赖于时间t的情况下,构造了带
再生障碍性贫血是临床上一种常见的血液系统疾病，而重型再生障碍性贫血(以下简称重型再障)病情危重，对患者的危害性极大。起病急、进展迅速是重型再障的特征，感染发热以及出血是重型再障患者的主要临床表现形式。重型再障是一种骨髓衰竭性疾病，在临床主要通过免疫抑制剂来进行治疗，将并发风险降低。本文主要针对重型再生障碍性贫血的临床诊治策略等展开综述，为今后更好地治疗重型再障提供参考依据。