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生物传感器是一门由生物、化学、物理、医学、电子技术等多个学科相互渗透成长起来的新学科。近二十年来,由于新原理、新技术的不断运用,生物传感技术取得了长足的进展,石英谐振式免疫传感器结合了石英晶体谐振器的高度质量敏感性和免疫反应的高度特异性,是当前生物传感技术研究的热点之一,与传统免疫分析方法相比,这类传感器具有仪器装置简单、灵敏度高、检测快速、无需标记、操作简便、能实时检测、成本低等优点,其潜在的用途很广,目前已广泛用于疾病检测、食品检验、环境监测、发酵工业、军事侦察等多个领域。
本论文以AT切9.8MHz表面镀金石英晶体为基体传感器,研究了快速定量定性检测丙肝(hepatitisCvirus,HCV)的方法,为丙肝病毒的临床检测方法提供了新的方法学依据。首先制作9.8MHz表面镀金石英晶体做基体传感器,然后将设计的丙肝病毒表位嵌合抗原作为特异性探针,利用自组装单层膜法、蛋白A法、共价交联法将抗原固定在石英晶体的电极表面,并采用牛血清白蛋白进行封阻,研制成压电免疫传感器用于丙肝病毒的检测。
在丙肝特异性探针固定过程中,探索了石英晶体的结构、预处理条件、温度、pH及离子强度不同条件对探针固定的影响,总结出金表面预处理用Piranha溶液浸泡2分钟为宜,抗原固定温度在37℃时、pH在7.2左右、离子强度在0.01mol/1时固定量最大,采用AT切9.8MHz石英晶体传感器用不同的方法对标准抗体/抗原溶液和血清溶液进行定量和定性检测。
自组装方法中,若抗原浓度是55μg/ml,则抗体或者血清溶液的检测浓度在5-100μg/ml浓度范围内,响应曲线能够呈良好的线性关系,并选了10个不同的晶体做重复性实验,结果证明重复性良好,相对标准偏差为9.2%。又做了特异性实验,采用封阻剂BSA对晶体表面的活性基团进行封阻,以防止非特异性吸附,从而显著降低了检测的假阳性发生率。
在采用蛋白A方法进行实验摸索时,由于蛋白A分子同时能与抗体和金形成非常稳定的复合物,因此采用蛋白A固定。在实验中采用了0.05%的吐温20PBS溶液清洗,发现用此溶液清洗三次可使表面非特异性吸附降低到最低。并采用两种封阻剂即小牛血清、牛血清白蛋白和未封阻结果作了对比,实验得知,采用牛血清白蛋白封阻效果最好。对于此种方法,还采用原子力显微镜追踪了其免疫反应。
要实现此种方法的产业化,需要一种成本最低、易操作、并且准确度最高的方法,据本实验可知,蛋白A方法最适合产业化,因此值得进一步探索,把它进行产业化研究。