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【目的】研究PD-0332991联合顺铂对人肺腺癌细胞的作用效果及逆转耐药可能,并初步讨论其药物联用的协同作用。【方法】1.首先通过CCK-8实验分别检测顺铂和PD-0332991对人肺腺癌细胞系A549细胞的增殖抑制情况,然后使用同样方法检测顺铂和PD-0332991对顺铂耐药细胞A549/CDDP增殖的影响。分别用顺铂(0,1,2,4,8,16,32,64,128,256μg/ml)和PD-0332991(0,2.5,5,10,20,40,80,160μmol/L)处理A459及A459/CDDP细胞24小时,加入10%CCK-8试剂;通过测量吸光度,分别计算各组药物对细胞的IC50。比较顺铂对A549与A549/CDDP细胞的IC50,计算耐药指数,观察其耐药性。2.使用不同浓度的顺铂(0,1,2,4,816,32,64,128μg/ml)联合1/2*IC50浓度的PD-0332991分别处理A549细胞和A549/CDDP细胞24小时,计算联合用药时顺铂对两种细胞的抑制率及IC50,计算加入PD-0332991后的顺铂耐药指数,通过对比加药前后的耐药细胞IC50的变化,观察该药是否具有逆转人肺腺癌细胞A549对顺铂耐药作用。然后计算顺铂及PD-0332991的联合作用指数,判断两种药物是否具有协同性。3.采用细胞流式实验单染色法(PI)检测PD-0332991和顺铂联合使用时,对人肺腺癌细胞周期的分布影响。然后分别用1/2*IC50浓度的PD-0332991,顺铂,双药联合处理A549细胞24小时后,并增加空白对照组;采用Annexin V/PI双染色法检测人肺腺癌细胞的凋亡情况,观察药物联合使用时是否促进细胞凋亡。4.使用1/2*IC50浓度的PD-0332991,顺铂,双药联合及空白培养基处理A549细胞后,采用蛋白免疫印记法(Western Blot)检测人肺腺癌细胞周期相关蛋白Rb,Phospho-Rb,CDK-4,CDK-6,E2F1,Cyclin D1;凋亡相关蛋白caspase-3、bcl-2,耐药相关蛋白β-catenin的表达水平,讨论联合用药对细胞周期、凋亡和耐药相关蛋白表达的影响。【结果】PD-0332991能够降低人肺腺癌细胞的活力,抑制其增殖;当PD-0332991联合顺铂用药时,两种药物之间能够产生的协同作用对肿瘤细胞的抑制程度较单药使用时显著增强。而且,作用于顺铂耐药细胞,能够增强对细胞的毒力作用,并且能够一定程度上增敏顺铂对肺腺癌细胞杀伤作用,起到逆转耐药效果。PD-0332991联合顺铂处理肺腺癌细胞后,细胞核破坏及细胞凋亡比例增加,相对应的凋亡相关蛋白Caspase-3通路在耐药细胞中得到激活,bcl-2抗凋亡蛋白表达被抑制。但是作为细胞周期抑制剂,PD-0332991对细胞周期的抑制作用在联合顺铂后减弱。蛋白免疫印迹提示Rb蛋白在药物联用后表达降低,但CDK-4/6及Cyclin D1的表达增强。【结论】PD-0332991能够降低人肺腺癌细胞活力,抑制其细胞周期,使其停滞于G1期;当与顺铂联用时,对肺腺癌细胞能够产生药物协同作用;并且用PD-0332991处理后的顺铂耐药细胞,其耐药指数较前有所降低,存在一定逆转耐药效果。PD-0332991与顺铂联合用药后,肺腺癌细胞凋亡比例增加;另外,顺铂可能降低PD-0332991对细胞周期的抑制作用,使一部分细胞周期蛋白表达增强。