目的:建立巴马小型猪背部皮肤瘢痕模型,利用表达谱基因芯片技术,筛选巴马小型猪皮肤瘢痕组织与正常皮肤组织差异表达的相关基因及通路,选取感兴趣的差异基因,验证芯片的结果,探讨其在瘢痕形成过程中可能的作用。方法:取6只健康巴马小型猪,在背部两侧制备创面,左右两侧分别对称性制备6~8块创面,大小均为3×3 cm。背部右侧烫伤创面的制备,使用特制烫伤仪制备烧伤创面,将烫伤仪烫头温度设定为100℃,烫头接触时间为20秒;背部左侧采用手术刀切割方式切取非全厚皮片,将创面所揭除的皮片作为正常皮肤标本保存进入后续实验,制备的创面止血处理后,暴露待其自然愈合,观察创面愈合情况;建模第21天、56天分别从动物背部皮肤创面组织中央部位采集创伤愈合及瘢痕组织标本。常规切片染色行形态学观察,提取正常皮肤与切割伤和烧烫伤的第56天瘢痕组织的总RNA并合成双链cDNA,体外转录合成生物素标记cRNA,与Affymetrix公司的GeneChip?Porcine Genome Array表达谱芯片进行杂交,分析筛选出瘢痕组织的差异表达基因,GO功能富集分析法对差异表达基因进行分析,KEGG通路分析了解两者的差异。根据生物信息学选取KEGG通路分析富集的Hippo信号通路中部分有代表意义的基因通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法做功能验证。结果:1、大体观察:建模第56天观创面,中央可见增生组织,凸出猪背部皮肤表面,呈条索状,质韧;HE染色镜下见真皮乳头消失,胶原纤维增多,提示建模成功。2、表达谱芯片结果数据分析:第56天巴马小型猪背部皮肤瘢痕与正常皮肤组织相比,共筛选出897个差异表达基因,其中234个表达上调,663个表达下调。3、GO功能分析结果显示,主要参与皮肤发育、表皮细胞分化、负调节代谢过程等生物过程,大部分基因位于细胞连接、离子通道复合物、多聚核糖体等细胞成分中,涉及金属酶、淀粉酶活性的调节等分子功能。4、KEGG通路分析结果显示差异基因显著富集于15个通路,主要涉及Hippo信号通路,TGF-β信号通路、花生四烯酸代谢、氨基酸的代谢等通路。5、实时荧光PCR结果显示:与正常皮肤相比,第56天瘢痕组织中CTGF、BMP-7、ID1、CDH1的mRNA表达均有差异(P<0.05),且与基因芯片结果一致,CTGF mRNA表达呈上调趋势,BMP-7、ID1、CDH1的mRNA表达呈下调趋势,验证了基因芯片检测结果。6、免疫组织化学结果显示:与正常皮肤相比,第56天瘢痕组织中CTGF和BMP-7的蛋白表达有显著差异(P<0.05),CTGF表达呈上调趋势,BMP-7表达呈下调趋势。结论:本研究构建了巴马小型猪皮肤瘢痕基因表达谱,筛选出与正常皮肤差异表达的基因,涉及大量基因和多个通路,其中Hippo信号通路和TGF-β信号通路可能与皮肤瘢痕的形成有关,CTGF、BMP-7可能在皮肤瘢痕的形成中发挥作用。