目的：构建包含碳酸酐酶IX和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的DNA疫苗载体,研究其体外表达情况,旨在为今后研制治疗性肾细胞癌DNA疫苗奠定基础。方法：提取肾细胞癌组织总RNA,利用RT-PCR扩增碳酸酐酶IX全长cDNA,以pORF-hGM-CSF为模板通过常规PCR扩增人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；应用分子克隆技术将两PCR产物分别定向克隆至载体pVAX1的多克隆位点上,构建重组质粒pVAX1-CAIX-GM。将测序正确的重组质粒通过脂质体法转染至HEK293细胞中,通过免疫细胞化学与原子力显微镜及免疫印迹法检测蛋白表达情况。结果：PCR、酶切鉴定、测序等方法证实疫苗载体pVAX1-CAIX-GM构建成功。免疫细胞化学与原子力显微镜检测表明重组质粒转染HEK293细胞后可以在真核细胞中表达碳酸酐酶IX；免疫印迹法在预期位置可见到与CAIX抗体特异性结合的蛋白。结论：成功构建了肾细胞癌DNA疫苗载体pVAX1-CAIX-GM,并在HEK293细胞中正确表达,为进一步研究该DNA疫苗在体内的免疫应答特点和免疫保护效果奠定基础。