微生物转化人参主皂苷为稀有皂苷的研究

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人参是我国传统名贵药材。近年来,许多研究表明,人参稀有皂苷(如Rh2、Rg3、C-K等)具有极强的生理活性,尤其在抗肿瘤方面显示了独特的作用。因此,本文主要研究人参皂苷的微生物转化,筛选出多种人参主皂苷转化为稀有皂苷的高效菌株。本研究从土壤中分离纯化得到298种微生物,筛选出176种能够产生p-葡萄糖苷酶的菌株。利用176种产p-葡萄糖苷酶的菌株对人参主皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd和Rg1进行微生物转化实验,使人参皂苷Rbl转化为C-K的菌株19种;使人参皂苷Rb2转化为C-Y的菌株17种;使人参皂苷Rc转化为Mc的菌株4种,转化为Rh2的菌株1种,转化为C-K的菌株10种;使人参皂苷Rd转化为Rh2的菌株1种,转化为C-K的菌株17种;使人参皂苷Rg1转化为F1的菌株3种,转化为PPT的菌株2种。其中,菌株GH9、GH21和GH26对人参主皂苷的转化率相对较高。菌株GH9、GH21和GH26对人参皂苷的转化条件进行了优化。其结果菌株GH9的最佳液体培养基为实验室自制培养基(YB),初始pH值为4.0-6.0,最佳发酵温度为40℃。菌株GH21的最佳液体培养基为水,初始pH值为3.0-6.0,最佳发酵温度为40-60℃。菌株GH26的最佳液体培养基为实验室自制培养基(YB),初始pH值为4.0-8.0,最佳发酵温度为60℃。菌株GH9对Rbl转化率为86.1%(转化为C-K),对Rd转化率为52.6%(转化为C-K)。菌株GH21对Rbl转化率为82.7%(转化为C-K),对Rd转化率为63.0%(转化为C-K),对Rgl转化率为97.8%(转化为F1)。菌株GH26对Rbl转化率为76.6%(转化为C-K),对Rd转化率为40.5%(转化为C-K)。对高效菌株进行了16S rDNA测序,并根据测序结果构建了无根系统发育树,结合形态学分析,确定了菌株GH9菌株属于青霉属(Penicillium),菌株GH21属于芽枝霉属(Cladosporium),菌株GH26属于Fungal。为准确可靠的定量分析人参皂苷及其转化产物,对HPLC方法进行了探讨。结果表明,最佳分析条件流动相为乙腈和水;C18柱;检测波长:203 nm;流速:1.0 mL/min。该分析方法可以达到很好的分离效果,测定方法简便、快捷。
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