伊马替尼(Imatinib)是临床治疗胃肠间质瘤(Gastrointestinal Stromal Tumors,GIST)和慢性髓系白血病(Chronic Myelogenous Leukemia,CML)的一线药物,然而部分患者在获得一定时间的缓解期后,由于对Imatinib产生了继发性耐药,导致病情迅速进展。Bex是一类功能尚未阐明的小分子信息转导中介体,在先前的研究中,我们发现hBex1参与了Imatinib的耐药发生过程.阐明hBex1介导的信号传导通路,对于明确Imatinib的耐药机制,为进一步开发分子靶向药物有着重要意义。　　 目的:建立酵母双杂交系统,从K562细胞cDNA文库中筛选hBex1相互作用蛋白质,并对候选蛋白进行初步鉴定分析。　　 方法:1.从pEGFP-C1-hBex1中将hBex1基因开放读码框架克隆至pGBKT7载体,构建pGBKT7-hBex1重组质粒,并检测质粒对酵母的毒性和自激活活性;2.从K562细胞中提取RNA,通过SMART技术和LD-PCR技术扩增K562细胞ds cDNA;3.将pGBKT7-hBex1,pGADT7-Rec、ds cDNA共转化感受态酵母,通过SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板筛选阳性克隆;4.将获得的阳性克隆pGADT7-library质粒与pGBKT7-hBex1质粒共转化感受态酵母,通过SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板对相互作用进行验证;5.对验证后的阳性克隆质粒进行测序和生物信息学分析。　　 结果:1.构建了酵母表达质粒pGBKT7-hBex1,检测证实重组质粒对酵母细胞无毒性作用,无自激活活性;2.共转化酵母后从SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板筛选出17个阳性克隆,划线转种平板重复检测筛选出13个阳性克隆;3.13个阳性克隆中提取的pGADT7-library重组质粒与pGBKT7-hBex1质粒共转化感受态酵母,均能在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板上生长;4.对验证后阳性克隆质粒测序和生物信息学分析共获得5个候选基因。　　 结论:1.构建了pGBKT7-hBex1重组质粒,该质粒适合酵母双杂交系统;2.应用酵母双杂交系统,从K562细胞cDNA文库中筛选得到5个基因,其编码蛋白与hBex1有相互作用。