论文部分内容阅读
[目的]探讨Cdhl-APC在全脑缺血大鼠海马组织中的表达及活性变化。[方法]24只成年雄性SD大鼠被随机分为3组：对照组、脑缺血/再灌注1天组和脑缺血/再灌注3天组,每组8只大鼠。脑缺血组采用四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,对照组为假手术组。脑缺血组在再灌注后1、3天时将大鼠在麻醉状态下处死,并取海马组织进行后续研究。采用TUNEL法评估全脑缺血再灌注后大鼠海马区神经元的凋亡情况；采用Western blot法检测Cdhl及其下游底物SnoN、Skp2的表达变化。[结果]与对照组相比,脑缺血/再灌注1、3天组的大鼠大脑海马区均出现大量TUNEL阳性细胞；免疫组织化学染色显示,对照组Cdhl高表达于海马神经元核内,脑缺血/再灌注1、3天组海马神经元内的Cdhl出现核外转移现象,并且其蛋白表达显著减少(P<0.05)；与此同时,与对照组相比,脑缺血组再灌注后1、3天Cdhl-APC的下游底物SnoN、Skp2的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]大鼠全脑缺血再灌注后Cdhl-APC的表达及活性下降,此变化可能与缺血性神经元凋亡的过程相关,此发现为进一步探讨Cdhl-APC在中枢神经系统损伤中的作用提供了新的线索。[目的]探讨Cdhl-APC在维持正常神经元糖代谢特征中的作用；探讨神经元OGD损伤后糖代谢的变化情况,并进一步通过慢病毒上调OGD神经元内Cdhl水平,探讨其对恢复神经元糖代谢特性,抗神经元凋亡的作用。[方法]体外培养大鼠原代皮层神经元,并随机分为4组：对照组、OGD/R组、OGD/R+Cdhl’慢病毒干预组、OGD/R+空病毒干预组。采用OGD法建立离体神经元OGD/R模型；采用重组克隆技术,构建特异性上调Cdh1基因的野生型慢病毒和对照空病毒。采用Western-blot法检测OGD后神经元Cdhl及其下游底物SnoN、Skp2的表达变化情况及各组糖酵解、磷酸戊糖途径关键酶的变化；免疫组化与TUNEL双标法检测各组神经元凋亡情况。[结果]Western-blot结果显示,与对照组相比,OGD/R神经元Cdhl表达明显下降,与此同时其下游底物SnoN、Skp2表达明显增高(P<0.05)；正常神经元感染野生型Cdhl慢病毒后,出现Cdhl-GFP融合蛋白的表达,而被对照空病毒干预的神经元无此现象；对照组神经元糖酵解关键酶Pfkfb3无表达,与此相比,OGD/R组、OGD/R+Cdh1空病毒干预组糖酵解关键酶Pflcfb3表达明显升高(P<0.05),这一现象在OGD/R+Cdhl慢病毒干预组被显著抑制(O<0.05)；与对照组相比,OGD/R组、OGD/R+Cdhl空病毒干预组的PPP关键酶G6PD表达明显降低(P<0.05),而这一现象在OGD+Cdh1慢病毒干预组被显著抑制(P<0.05)；此外,与OGD/R组、OGD/R+Cdhl空病毒干预组相比,OGD+Cdhl’慢病毒干预组神经元凋亡率显著降低。[结论] OGD损伤后神经元糖代谢平衡被打破,糖酵解被激活,PPP被抑制,此机制参与神经元的凋亡；通过慢病毒上调Cdhl活性,使糖酵解关键酶Pfkfb3泛素化降解,维持神经元正常糖代谢状态(低糖酵解率,高PPP率),抑制神经元凋亡。