【摘 要】
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研究背景Th17细胞（Type 17 helper T cell,Th17 cell）属于辅助性CD4+T细胞亚群,在炎症性疾病、宿主感染的免疫防御和多种自身免疫性疾病中发挥着重要作用。由Th17细胞分泌的IL-17A和IL-17F是主要效应分子,维甲酸相关孤儿核受体γt（retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγt）是调控Th17细胞分化、分泌炎性细
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研究背景Th17细胞（Type 17 helper T cell,Th17 cell）属于辅助性CD4+T细胞亚群,在炎症性疾病、宿主感染的免疫防御和多种自身免疫性疾病中发挥着重要作用。由Th17细胞分泌的IL-17A和IL-17F是主要效应分子,维甲酸相关孤儿核受体γt（retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγt）是调控Th17细胞分化、分泌炎性细胞因子进而发挥功能的关键转录因子。已有研究证实RORγt存在多种方式的转录后修饰,本课题组前期研究发现p300和HDAC1可以调控RORγt的乙酰化从而影响Th17细胞分化与功能。PHB2属于prohibitin蛋白家族,是一种进化上高度保守的蛋白,功能的发挥常依赖于其在细胞内的定位。研究发现在细胞核内,PHB2具有调控转录因子的作用,在肌细胞分化过程中PHB2可以与成肌分化因子（myogenic determination factor,Myo D）和肌细胞增强因子2（myocyte enhancer-binding factor 2,MEF2）相互作用,抑制Myo D和MEF2转录活性进而抑制肌细胞分化。还有研究发现PHB2高表达在活化的T细胞膜表面。课题组在之前的研究中也初步证实PHB2具有正调控Th17细胞转录因子RORγt作用,但机制尚不清楚,有待深入研究。研究目的:探讨PHB2正调控Th17细胞转录因子RORγt的具体机制。研究内容:（1）免疫荧光实验分析PHB2和RORγt细胞内的定位。（2）实时荧光定量PCR分析Th17细胞诱导分化过程中PHB2、HDAC1、RORc、IL-17A及IL-17F基因m RNA表达水平。（3）Flag-RORγt-Jurkat稳转细胞株和Th17细胞中过表达或敲减PHB2后,免疫印迹实验、酶联免疫吸附实验及实时荧光定量PCR分析HDAC1、RORc、IL-17A、IL-17F蛋白和基因m RNA水平。（4）免疫共沉淀实验分析PHB2、HDAC1和RORγt三者相互作用。（5）免疫共沉淀实验分析PHB2和MDM2,MDM2和HDAC1相互作用。（6）PHB2对HDAC1泛素化水平及蛋白稳定性影响（7）PHB2和HDAC1对RORγt乙酰化水平影响（8）实时荧光定量PCR分析血吸虫感染小鼠肝脏PHB2、RORc、IL-17A、IL-17F基因m RNA表达变化。研究结果:（1）PHB2和RORγt可以共定位于细胞核内。（2）Th17细胞诱导分化早期PHB2表达升高,HDAC1下降,RORc、IL-17A、IL-17F随之升高后下降。（3）Flag-RORγt-Jurkat稳转细胞株和Th17细胞中过表达PHB2后减少HDAC1蛋白水平,增加RORγt蛋白和m RNA水平;敲减PHB2后结果相反。（4）HDAC1影响RORγt与PHB2结合。（5）Th17细胞中PHB2和MDM2,MDM2和HDAC1存在相互作用。（6）PHB2通过MDM2泛素化HDAC1促进其降解。（7）PHB2促进HDAC1降解抑制其对RORγt去乙酰化作用。（8）血吸虫感染小鼠早期肝脏组织PHB2、RORc、IL-17A、IL-17F基因m RNA水平均下降,后期开始升高。结论:Th17细胞中PHB2通过MDM2泛素化修饰HDAC1促进其降解,进而抑制HDAC1对RORγt去乙酰化修饰稳定RORγt蛋白水平,促进IL-17A和IL-17F表达。
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