【摘 要】
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目的:研究DJ-1在前列腺癌组织中的表达,结合临床病理特征,探索DJ-1与前列腺癌的关系。探讨DJ-1对前列腺癌LNCap细胞增殖和侵袭能力影响。方法:(1)选取51例前列腺癌患者组织样本作为实验组,50例良性前列腺增生患者组织样本作为对照组。实验组中患者均是未经内分泌治疗及放化疗的初诊患者,并根据Gleason评分水平进行亚分组(Gleason评分≤6、Gleason评分=7分和Gleason评
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目的:研究DJ-1在前列腺癌组织中的表达,结合临床病理特征,探索DJ-1与前列腺癌的关系。探讨DJ-1对前列腺癌LNCap细胞增殖和侵袭能力影响。方法:(1)选取51例前列腺癌患者组织样本作为实验组,50例良性前列腺增生患者组织样本作为对照组。实验组中患者均是未经内分泌治疗及放化疗的初诊患者,并根据Gleason评分水平进行亚分组(Gleason评分≤6、Gleason评分=7分和Gleason评分≥8分组)。采用免疫组化SP法检测50例良性前列腺增生和51例前列腺癌术后标本组织中DJ-1表达情况,分析DJ-1表达水平与前列腺癌的临床和病理参数之间的相关性;通过TCGA数据库挖掘前列腺癌组织和癌旁组织间DJ-1的表达及甲基化修饰水平差距。(2)培养前列腺癌LNCap细胞株并构建细胞转染模型,然后分成3组:空白对照组(CON)、阴性对照组(NC)和LNCap-si RNA组(KD)。通过绿色荧光检验转染效率,并采用Western blot和RT-q PCR验证沉默效率,然后采用CCK-8技术、平板克隆形成技术、Transwell小室实验和细胞划痕实验技术检测前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力。结果:(1)DJ-1在前列腺癌中的表达水平(IRS:3.7±0.51)明显高于前列腺增生(IRS:2.2±0.57),差异有统计学意义(P<0.05);Gleason评分≥8分组IRS:7.9±0.9,Gleason评分=7分组IRS:4.7±0.6,Gleason评分≤6分组IRS:2.7±0.6,其存在统计学显著性差异(P<0.05),DJ-1表达水平与前列腺癌Gleason评分呈正性相关。DJ-1表达高低与前列腺癌的分期、Gleason评分、TPSA值、转移病灶数有明显相关性(P<0.05)。TCGA数据库的挖掘前列腺癌组织的DJ-1 m RNA的表达量明显高于癌旁正常组织,而甲基化修饰水平显著低于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析显示DJ-1表达与PCa患者生化复发显著相关(P=0.032)。(2)经过慢病毒感染72h,绿色荧光检验转染效率在达80%以上。通过Western Blot和RT-q PCR分析沉默效率表明,KD组DJ-1的m RNA和蛋白表达水平显著低于CON组和NC组(P<0.01),而CON组与NC组间的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8实验显示KD组的细胞生长速度随着时间的推移明显低于NC组和CON组(P<0.01);平板克隆形成实验显示KD组的细胞增殖和克隆形成率明显低于NC组和CON组(P<0.05);Transwell显示KD组的侵袭细胞数明显低于CON组和NC组(P<0.01),CON组和NC组间侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05);细胞划痕实验显示KD组的划痕愈合度(12.26%)显著低于CON组(49.28%)和NC组(47.88%)(P<0.001)。结论:DJ-1在前列腺癌组织中显著上调,且与前列腺癌患者Gleason评分呈正性相关,并与前列腺癌的病理分期、TPSA值、转移灶数量有一定的关系,且DJ-1高表达与患者生化复发相关;沉默DJ-1表达可显著降低前列腺癌LNCap细胞增殖、侵袭及迁移能力。DJ-1可能成为前列腺癌新的肿瘤标志物及治疗新耙点。
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