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目的:研究人端粒酶逆转录酶h TERT在胃癌细胞中调控铁死亡的作用及分子机制。方法:1.以人胃癌细胞株为研究对象,erastin作为铁死亡诱导剂,在五株胃癌细胞SNU-1、SGC7901、MGC803、AGS、MKN45细胞中建立肿瘤细胞铁死亡模型。用erastin以一定的浓度梯度:1u M,2.5u M,5u,10u M,15u M,20u M,40u M处理胃癌细胞24小时,用CCK-8检测生长抑制率,通过q-PCR检测五株胃癌细胞内h TERT、SLC7A11、GPX4的表达确定后续实验研究对象为SNU-1和SGC791这两株胃癌细胞。2.为研究erastin杀死肿瘤细胞是否是通过诱导铁死亡,用erastin 20u M处理SNU-1,SGC7901两株胃癌细胞,通过透射电镜成像观察细胞内线粒体的变化以及其它亚细胞器的变化。分别用铁死亡抑制剂Fer-1,凋亡抑制剂Z-VAD-fmk,坏死抑制剂necrosttin-1,自噬抑制剂3-MA和erastin共处理细胞24小时,通过CCK-8检测生长抑制率,GSH检测试剂盒检测细胞内谷胱甘肽含量,MDA试剂盒检测细胞内脂质过氧化情况。3.研究h TERT铁死亡时,首先通过GEO数据库分析在胃癌中,h TERT和GPX4的表达相关,并用erastin刺激两株胃癌细胞后提取蛋白进行h TRET蛋白检测。通过构建h TERT稳定过表达细胞株lenti-h TERT-SNU-1/lenti-NC-SNU-1;lenti-h TERT-SGC7901/lenti-NC-SGC7901。用erastin(20u M)处理细胞24小时后,CCK-8检测生长抑制率,Western blot检测细胞内h TERT、p53、SLC7A11、GPX4的表达,q-PCR检测p53的表达。用蛋白酶体抑制剂MG123和erastin共处理细胞,检测细胞内p53蛋白水平。4.为研究h TERT促进p53蛋白降解是否通过MDM2,构建了Si-h-MDM2序列干扰MDM2表达,在erstin处理后检测细胞内p53蛋白水平。5.用Graph pad Prism 6.0数据分析实验结果,p值小于0.05有意义。结果:1.Erastin处理五株人胃癌细胞后后CCK-8检测到细胞的生长抑制率不同,其中SNU-1和SGC7901胃癌细胞在erastin处理24小时后生长抑制率较高,q PCR检测到在SNU-1、SGC7901中SLC7A11、GPX4表达较低。2.erastin诱导SNU-1、SGC7901胃癌细胞的铁死亡。erastin处理24小时后透射电镜成像提示细胞内线粒体缩小,线粒体膜密度增加了。erastin+铁死亡抑制剂fer-1组生长抑制率较erastin组低,细胞内GSH含量较erastin组高,MDA水平较erastin组低。3.通过数据库分析,h TERT和GPX4在在胃癌中基因表达相关系数为0.22,p值小于0.0001。erastin处理后的细胞内h TERT蛋白水平上调。4.h TERT稳定过表达于SNU-1、SGC7901胃癌细胞中,过表达组SNU-1细胞较对照组在erastin处理24h后生长抑制率低。SGC7901过表达组细胞和对照组差异无统计学意义。在h TERT过表达的SNU-1胃癌细胞中,细胞在erastin处理后p53蛋白水平下调,m RNA水平无变化。SLC7A11和GPX4蛋白水平上调,而SGC7901细胞中较对照组差异无统计学意义。MG132抑制剂处理后过表达h TERT的SNU-1胃癌细胞内p53蛋白水平上调。4.h TERT和MDM2共定位于细胞核中,干扰lenti-h TERT-SNU-1细胞中MDM2表达后,细胞内p53蛋白水平回复。结论:erastin可诱导人胃癌细胞SNU-1、SGC7901铁死亡,h TERT通过泛素-蛋白酶体途径依赖MDM2促进p53蛋白降解,从而抑制SNU-1、SGC7901胃癌细胞铁死亡。