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目的:1.建立并评价EAE模型;2.探讨姜黄素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的干预作用及初步作用机制。方法:SPF级雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:正常对照组(Control组)、EAE模型组、EAE-DMSO组、EAE-雷帕霉素组、EAE-姜黄素组。除正常对照组(Control)外,其余各组通过少突胶质糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE动物模型,通过小鼠体重变化、神经功能评分以及病理HE染色和髓鞘Weil染色结果初步筛选出EAE模型。进一步用药物雷帕霉素、姜黄素干预EAE小鼠,观察各实验组小鼠脊髓组织病理HE染色和Weil髓鞘染色改变,并分别定位、定量检测相关蛋白的表达以及血清炎症因子的变化。结果:1.各实验组小鼠体重变化及神经功能评分结果:体重变化评估发现:Control组和EAE组小鼠体重在免疫后7天均有上升,且趋势相差不大;免疫后14天也呈增长趋势,但EAE组小鼠体重增长滞后;随后,免疫21天EAE组小鼠体重有所下降,Control组仍继续上升;至免疫后30天,各组小鼠体重趋于平稳,但EAE组小鼠平均体重明显低于Control组,差异有统计学意义(P<0.05)。神经功能评分发现:Control组小鼠活动正常,精神状态良好,并无特殊临床症状发生;而EAE模型组实验小鼠的平均发病时间是(8.83±0.41)d,首发临床症状为皮毛灰暗、尾巴不能自由活动、行动缓慢或轻微的步态反常;到发病高峰期的平均时间是(20.5±0.84)d,平均临床评分为(2.34±0.28),最高临床评分为(3.42±0.38)。与EAE模型组相比,姜黄素组和雷帕霉素组小鼠均能延缓病情,表现为发病开始时间显著延后,平均症状评分和最高症状评分均有统计学差异(p<0.05),但是两药物治疗组之间并无明显差异(p﹥0.05)。2.各实验组小鼠病理学观察:与Control组相比,EAE组和DMSO组均有明显的炎症浸润,姜黄素组和雷帕霉素组较EAE组炎性浸润情况有显著减轻,但姜黄素组和雷帕霉素组两组相比,其在炎性细胞浸润改变无明显差异。Weil髓鞘染色结果:在Control组中,髓鞘保存完好且排列整齐;但EAE组小鼠切片中蓝黑色髓鞘染色较Control组明显减少且呈现出不同程度的点状白色空泡的髓鞘缺失区域,而姜黄素组和雷帕霉素组髓鞘脱失范围及程度与EAE小鼠相比均显著减轻,且相比雷帕霉素组,姜黄素组髓鞘脱失程度较轻。3.姜黄素治疗前后脊髓组织中AKT、mToR和LC3-II的表达情况表明:与Control组相比,Akt、mTOR蛋白在EAE组和DMSO组表达明显增强,而姜黄素组和雷帕霉素组上升不明显。LC3-II在Control组脊髓组织中可见阳性表达,EAE组和DMSO组表达则明显下降,而在姜黄素组和雷帕霉素组表达下降并不明显。4.姜黄素治疗前后EAE小鼠Akt/mTOR自噬通路的变化表明:与Control组相比较,EAE组小鼠的脊髓组织中p-Akt、p-mTOR和P62呈高表达,而LC3-Ⅱ、Beclin-1呈低表达。相反,与EAE组相比,姜黄素组和雷帕霉素组中p-Akt、p-mTOR和P62呈低表达,而LC3-Ⅱ、Beclin-1表达明显增加(除p-Akt外,P<0.05),且两药物治疗组之间并无统计学差异(P>0.05)。此外,EAE组和姜黄素组之间的非磷酸化Akt和TOR蛋白无统计学差异(P>0.05)。5.姜黄素治疗前后各实验组血清中可溶性IFN-γ、IL-17和TNF-α的酶联免疫吸附测定结果显示:EAE模型组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、TNF-α的含量较Control组小鼠升高较显著,两者差异具有明显的统计学意义(P<0.05),而姜黄素治疗组和雷帕霉素组小鼠IFN-γ、IL-17质量浓度均较EAE模型组显著降低(P<0.05);与雷帕霉素组相比,姜黄素治疗组IL-17、IFN-γ表达量略有下降,而TNF-α有所上升,但均无统计学差异(P>0.05)。结论:1.用髓鞘少突胶质糖蛋白MOG35-55诱导SPF级雌性6-8周龄C57BL/6近交系小鼠成功建立EAE小鼠模型;2.姜黄素治疗明显缓解了EAE小鼠临床症状和中枢神经系统炎症浸润;3.姜黄素可能通过调节Akt/mTOR自噬信号通路以平衡EAE小鼠体内自噬水平的表达,进一步减轻中枢神经系统及外周炎症的反应状态,缓解临床症状,而对EAE发挥保护作用。