论文部分内容阅读
背景：尿道下裂（Hypospadias）和隐睾（Cryptorchidism）是先天性泌尿外生殖器畸形中最常见的两种疾病，其发病率高，在近年来还有继续增高的趋势。这两种疾病均需要手术治疗，而手术治疗效果并不理想，易产生手术并发症，或者术后仍不能完全恢复功能。本课题组前期研究发现，大鼠孕期暴露于DEHP可致仔代雄性大鼠发生尿道下裂及隐睾。本研究在前期研究结果的基础上，将进一步探索尿道下裂及隐睾的发病机制，为进一步预防尿道下裂及隐睾的发生提供理论依据。目的：在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl) phthalate，DEHP]诱导的大鼠先天性生殖畸形模型上，研究细胞外信号调控激酶（extracellular signal-regulated kinase, ERK）在DEHP暴露后的胎鼠阴茎、睾丸中的表达变化，初步探讨先天性泌尿生殖畸形发生机制。方法：将SD孕鼠随机分为DEHP组(750mg/kg体重/d)和大豆油对照组，每组20只，各组分别于母鼠孕期12～19d(gestation day，GDl2～19)持续经口灌注给药。各组分别取10只孕鼠让其正常分娩，并计数每窝产雄性活仔鼠数量；出生后1/3/7/14/21/30日龄(postnatalday，PND)时称取雄性仔鼠体重并测量肛门生殖器距离(anogenitaldistance，AGD)；30日龄时逐个检查尿道下裂及隐睾的发生情况。余孕鼠在GD20行剖宫产取雄性胎鼠，应用实时定量聚合酶链反应(qPCR)和免疫组化方法分别检测胎鼠阴茎组织、睾丸组织中ERK1、ERK2的mRNA和蛋白表达水平。结果：DEHP组10只孕鼠共产仔82只，其中雄性39只；对照组10只孕鼠共产仔119只，其中雄性62只，组间比较，每窝活产仔数及活产雄性仔鼠数，DEHP组均较对照组明显减少（P<0.01）。各日龄动态观察雄性仔鼠，PND1DEHP组雄性仔鼠体重及AGD分别为6.32±0.60g、3.91±0.57mm，对照组分别为6.95±0.14g、4.67±0.20mm；PND3DEHP组雄性仔鼠体重及AGD分别为8.11±0.95g、5.42±0.67mm，对照组分别为9.98±0.29g、6.02±0.27mm；PND7DEHP组雄性仔鼠体重及AGD分别为14.02±2.39g、6.76±0.73mm，对照组分别为18.78±0.23g、8.43±0.46mm；PND14DEHP组雄性仔鼠体重及AGD分别为27.03±3.01g、10.20±0.80mm，对照组分别为32.98±0.69g、12.05±0.40mm；PND21DEHP组雄性仔鼠体重及AGD分别为42.48±4.61g、15.14±1.17mm，对照组分别为52.33±1.39g、18.16±0.73mm；PND30DEHP组雄性仔鼠体重及AGD分别为66.08±8.67g、20.88±1.36mm，对照组分别为84.82±7.56g、23.73±1.09mm。各日龄雄性仔鼠组间比较，DEHP组体重及AGD均较对照组明显减小（P＜0.01）。PND30检查仔鼠，DEHP组发生尿道下裂11只，发生率约为28.2%，对照组无尿道下裂发生，组间比较，差异具有统计学意义（P<0.01）；DEHP组发生隐睾20只，发生率为51.3%（其中单侧隐睾10.3%，双侧隐睾41.0%），对照组无隐睾发生，组间比较，差异具有统计学意义（P<0.01）。免疫组织化学方法观察，实验组胎鼠阴茎组织中磷酸化ERK（p-ERK）蛋白表达水平较对照组有增加趋势，总ERK（T-ERK）两组无明显差异。qPCR检测结果显示，ERK1和ERK2二者mRNA在正常大豆油对照组相对于内参GAPDH的表达分别是0.82±0.13和1.32±0.33，在DEHP灌胃的实验组其相对表达分别是1.09±0.18和1.81±0.22，与对照组比较，实验组的ERK1和ERK2mRNA表达水平均显著增高(P<0.05)。胎鼠睾丸组织免疫组织化学方法观察，p-ERK及T-ERK在实验组和对照组无明显差异。结论：DEHP诱导先天性尿道下裂发生可能与胎鼠阴茎组织中ERK信号的过度表达有关；隐睾发生可能与胎鼠睾丸组织中ERK信号无明显关系。由ERK介导的空间调控异常可能是导致尿道下裂发生的重要机制之一。