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目的:探讨褐藻多糖硫酸酯(fucoidan polysaccharide sulfate,FPS)对尿酸性肾病(UAN)大鼠肾脏损伤的影响以及机制研究。方法:1.FPS对UAN大鼠肾小管上皮细胞保护作用的体内研究:1.1UAN大鼠模型构建:模型组采用氧嗪酸钾(250mg/kg)联合腺嘌呤(100mg/kg)灌胃给药,正常对照组给与等剂量蒸馏水,1次/天,连续灌胃14天造模。1.2 FPS改善UAN大鼠肾小管损伤的作用:FPS对氧嗪酸钾联合腺嘌呤诱导的高尿酸大鼠的疗效观察:60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、褐藻多糖硫酸酯低中高剂量组,于第14天处死并检测各组大鼠血清尿酸、尿素氮、肌酐水平,HE染色观察肾小管组织病理学改变,透射电镜检测肾小管上皮细胞微结构变化,ELISA法检测肾脏ROS表达水平,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫荧光法检测肾脏LC3B表达。2.FPS减轻高尿酸诱导肾小管上皮细胞损伤的体外研究2.1高尿酸诱导肾小管上皮细胞损伤细胞模型的建立:2.1.1不同浓度UA在不同时间点对肾小管上皮细胞(NRK-52E)的增值影响:体外培养条件永生性大鼠肾小管上皮细胞接种于96孔板上,每孔4000个细胞,分为五组:标准组、180umol/L、90umol/L、45umol/L、22.5umol/L,另设空白孔,每组设置5个复孔,培养12h、24h、48h后分别采用CCK8法检测细胞增值。2.1.2不同浓度FPS在不同时间点对特定UA浓度诱导的NRK-52E细胞的增值影响:体外培养条件永生性大鼠NRK-52E细胞接种于96孔板上,每孔4000个细胞,分为五组,每组用UA(180umol/L)进行刺激,不同浓度FPS干预:UA(180umol/L)、200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml,另设空白孔,5个复孔,培养12h、24h、48h后分别采用CCK8法检测细胞增值。2.2 FPS对HUA诱导NRK-52E细胞凋亡影响:体外培养NRK-52E细胞随机分为四组:正常组、尿酸组、FPS低剂量组、FPS中剂量组、FPS高剂量组。培养24h。用ELISA法检测ROS表达含量;流式细胞仪检测细胞凋亡。2.3 FPS对HUA诱导NRK-52E细胞自噬影响:体外培养NRK-52E细胞随机分为四组:正常组、尿酸组、FPS低剂量组、FPS中剂量组、FPS高剂量组。培养24h。透射电镜观察细胞内自噬体、线粒体变化;免疫荧光法检测LC3B表达;Western Blot检测Parkin、Pink、LC3BII蛋白的表达。结果:1.FPS对UAN大鼠肾小管上皮细胞保护作用的体内研究:1.1 UAN大鼠模型构建:生化检测结果表明:模型组血清UA、BUN、Cr明显高于正常对照组,表明模型组造模成功。1.2 FPS改善UAN大鼠肾小管损伤的作用生化检测结果显示:FPS治疗组及别嘌呤醇组与模型组相比血清UA、BUN、Cr明显降低。HE染色显示:模型组大鼠肾脏中部分肾小管完全破坏,大量黄褐色尿酸盐结晶沉积。FPS治疗组及别嘌呤醇组的肾小管明显改善。透射电镜观察:模型组肾小管上皮细胞微绒毛排列紊乱,有溶解,基底部可见大量线粒体、溶酶体,以及自噬体。模型组肾脏ROS含量增多,FPS治疗组肾脏ROS表达明显下降。TUNEL法检测显示:与正常对照组相比,模型组肾小管上皮细胞凋亡明显增多,FPS治疗组及别嘌呤醇组凋亡细胞显著减少。免疫荧光检测显示:模型组肾脏细胞内LC3B高表达,FPS治疗组肾脏细胞内LC3B表达明显下降。2.1高尿酸诱导肾小管上皮细胞损伤细胞模型的建立:2.1.1CCK8结果显示:与标准组相比,尿酸浓度为180umol/L,刺激时间为24h时,NRK-52E细胞增殖明显已有降低。2.1.2CCK8结果显示:与尿酸组相比,FPS浓度分别为200、100、50ug/ml,干预时间为24h时,NRK-52E细胞增殖活力已有明显改善。2.2 FPS对HUA诱导NRK-52E细胞凋亡影响:尿酸组与正常组相比,ROS含量明显上升,FPS治疗组与尿酸组相比明显下降,并存在一定剂量依赖关系。流式细胞仪显示,尿酸组与正常组相比细胞凋亡明显,FPS治疗组能明显改善细胞凋亡。2.3 FPS对HUA诱导NRK-52E细胞自噬影响:细胞透射电镜结果显示:尿酸组细胞膜破坏严重,线粒体肿胀,自噬体增多,FPS组膜结构及线粒体损伤减轻,自噬体减少;免疫荧光显示:与正常组相比,尿酸组LC3B表达增多,FPS治疗组LC3B表达明显下降；Western Blot结果显示:尿酸组能明显增加Parkin、Pink、LC3BⅡ蛋白表达,FPS治疗组能显著下调尿酸诱导的Parkin、Pink、LC3BⅡ蛋白的高表达。结论:1、FPS能改善UAN大鼠的肾功能损害。2、UAN的发生发展与肾小管上皮细胞ROS表达升高,线粒体损伤,过度自噬相关,FPS能改善UAN肾小管上皮细胞损伤。