研究目的博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）是一种具有高度嗜神经性的病毒，宿主范围很广，可引起多种温血动物的自然感染，表现出以明显的精神、行为异常等为特征的神经精神症状。这与人类神经精神疾病患者的临床表现相类似，人们开始研究该病毒感染与人类神经精神疾病之间的关系。需要建立高效灵敏和准确的检测技术对BDV进行更加全面的研究。血清免疫学检测具有简单、快捷、特异等优点可以作为BDV流行病学检测和临床诊断的一项重要手段，从而可以结合核酸检测来增大诊断的准确率。BDV基因组编码6种蛋白。其中核蛋白和磷蛋白分别在感染细胞的胞核和胞浆中表达水平较高，可作为检测的主要目标抗原。本实验利用动物免疫技术、细胞杂交-杂交瘤技术制备抗BDV核蛋白的多克隆抗体和单克隆抗体，并鉴定其生物学、免疫学和理化特性。为研究BDV感染的发病机制以及研制相关诊断检测试剂盒奠定了基础。研究方法1.将本实验室早期构建的重组载体pET14b-p40转化至感受态大肠杆菌，IPTG诱导融合蛋白的表达，His-tag亲和层析纯化获得BDV重组核蛋白。2.将重组核蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，收集免疫后血清，制备和纯化多克隆抗体，ELISA测定抗体效价，并进行Western-Blot鉴定。3.利用重组核蛋白免疫BALB/c小鼠，取免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合，用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤，挑选效价高的杂交瘤细胞进行有限稀释法克隆和亚克隆，建立稳定分泌抗BDV核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并制备、纯化单克隆抗体，对其进行特异性、效价等鉴定。结果1.成功表达并纯化了BDV核蛋白。经过电泳检测，该蛋白分子量约为40KD。2.BDV核蛋白多克隆抗体纯化后经ELISA检测效价高达1：256000，该抗体与原核和真核系统中表达的核蛋白均能发生特异性反应。3.建立了一株能稳定分泌抗BDV核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F6E8，此杂交瘤细胞株稳定性好，连续传代20次、反复冻存复苏4次、仍能分泌单克隆抗体。该抗体重链为IgG2a，轻链为κ。ELISA法测得细胞上清的效价达1:1600以上，腹水的效价达1:32000以上。WB实验和免疫荧光实验结果都表明该单克隆抗体能特异性结合重组BDV核蛋白及天然BDV核蛋白。结论本研究成功制备了抗BDV核蛋白的多克隆抗体和单克隆抗体，可以为BDV的基础研究提供有力的工具，为研究针对BDV的检测新方法，探讨BDV与人类神经精神疾病的关系奠定了基础。