鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种高度接触性传染病。IBDV的靶细胞是未成熟的B淋巴细胞或B前淋巴细胞,感染后很快发生变性和坏死。由于法氏囊是B细胞成熟的重要器官,鸡在感染IBDV后,淋巴滤泡内的B细胞大量裂解死亡,网状细胞呈凋亡过程,最终导致法氏囊等器官萎缩而引起免疫抑制,结果可使鸡群对其它疾病易感性增加,对疫苗(如新城疫、禽流感等)接种的免疫应答能力也下降,对养鸡业造成严重的经济损失。 VP2是病毒的重要结构蛋白,含有血清型特异的能诱导中和抗体的抗原决定簇,是病毒主要的宿主保护性免疫原。本试验应用RT-PCR技术,将从河南某鸡场分离并鉴定的传染性法式囊病毒分离株——IBDV H-1株,进行病毒VP2基因的克隆与表达。首先提取病毒总RNA,然后进行反转录和PCR反应,扩增得到1461bp大小的VP2蛋白基因。将扩增产物克隆入pGEM-T载体,构建了pTVP2重组质粒。序列分析表明,该VP2基因及推导氮基酸序列与日本和欧洲超强毒株序列有较高的同源性,特征性氨基酸变异相似,提示H-1毒株可能为超强毒株。进化分析也表明H-1毒株与欧洲超强毒株UK661和日本超强毒株OKYM位于同一进化分支,提示H-1株病毒可能为超强毒株。 将pTVP2载体中VP2基因,亚克隆于原核表达载体pET-28a,经双酶切和PCR鉴定,成功构建了VP2基因原核表达载体pETVP2。经IPTG诱导表达了53.7 Kd的VP2蛋白。表达蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,能够与鸡IBDV抗血清特异性反应。本试验为进一步研究VP2蛋白的功能和研发相应的诊断技术奠定了基础。