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系统性红斑狼疮是一种累积多脏器的自身免疫性疾病,其中狼疮肾炎是最严重的并发症之一。临床上大约有40%-70%的狼疮患者都表现出肾功能障碍和肾炎症状。狼疮肾炎发病过程通常伴随着自身抗体水平的产生;炎性细胞因子的升高;免疫复合物的沉积以及免疫细胞的浸润。其中T细胞和巨噬细胞在狼疮肾炎疾病的发生发展中扮演着重要角色,同时中性粒细胞通过形成NETs参与狼疮肾炎的发病过程。而一些趋化因子包括IP-10、RANTES、MCP-1等通过介导炎性细胞浸润肾脏参与狼疮肾炎的发病。这些趋化因子及其受体被认为是治疗狼疮肾炎的重要靶点。中药雷公藤作为传统中药,一直被广泛应用于治疗各类自身免疫性疾病以及炎症,雷公藤内酯醇是从雷公藤植物中提取得到的环氧二萜内酯化合物。雷公藤内酯醇具有良好的免疫抑制活性,并对多种自身免疫性疾病具有良好的治疗效果。然而其较强的毒副作用,限制了在临床上的应用。LLDT-8是雷公藤内酯醇的衍生物,在保留较强的免疫抑制活性的同时,大大降低了毒性。LLDT-8的CC50为256.6±73.8nM,而雷公藤内酯醇仅为2.1±0.2nM。本文主要探讨LLDT-8对狼疮肾炎的治疗作用。首先我们采用8周龄雌性MRL/lpr小鼠,两天一次口服给予0.125mg/kg的LLDT-8至小鼠22周龄。观察LLDT-8在MRL/lpr小鼠上的治疗效果,发现与模型组相比:LLDT-8给药组小鼠蛋白尿显著下降,生存率显著升高,血肌酐和血尿素氮水平也明显降低,肾脏免疫复合物沉积减少,肾脏病理损伤减轻。初步证实LLDT-8对于狼疮肾炎具有良好的治疗作用。为了更确切考察LLDT-8对自发性狼疮小鼠肾炎的治疗效果,我们采用三个剂量LLDT-8对8周龄MRL/lpr小鼠进行治疗,分别为0.125mg/kg,0.063mg/kg,0.031mg/kg,两天一次口服给药至小鼠17周龄,观察三种剂量LLDT-8对MRL/lpr小鼠的治疗效果。发现LLDT-8三个剂量都能够降低MRL/lpr小鼠蛋白尿水平;降低血清中BUN、CRE的水平,减少肾脏免疫复合物沉积,再次验证了LLDT-8对MRL/lpr小鼠的治疗作用。LLDT-8药理机制研究发现:LLDT-8能够降低小鼠肾脏中炎性细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-6和TNF-α水平,而小鼠血清中这些细胞因子的水平并没有显著变化,结果提示lldt-8可能影响了肾脏组织中浸润的免疫细胞功能或数目。我们从各实验组小鼠的肾脏中分离纯化得到单核细胞,运用facs方法检测了肾脏中浸润的t细胞比例,发现lldt-8给药组小鼠肾脏中t细胞及其亚群的浸润比例显著减少,而脾脏中t细胞比例并没有发生改变。随后我们检测了t细胞表达趋化因子受体cxcr3水平,发现脾脏中和肾脏中t细胞表面cxcr3并没有变化,而lldt-8给药组小鼠肾脏中t细胞相关趋化因子的水平ip-10、mig和rantes的水平显著降低。以上结果证实lldt-8能够通过减少t细胞相关趋化因子表达,抑制t细胞对肾脏的浸润。同时我们还发现lldt-8能够减少小鼠肾脏中巨噬细胞和中性粒细胞的浸润比例,降低相关趋化因子的表达水平。进一步证实lldt-8能够抑制巨噬细胞及中性粒细胞对肾脏的浸润。以上结果验证了lldt-8能够通过抑制趋化因子的表达,进而影响免疫细胞（t细胞及其亚群,巨噬细胞和中性粒细胞）在肾脏的浸润,从而发挥对肾脏的保护作用。接下来我们采用了另一种经典的自发性狼疮小鼠模型nzb/wf1小鼠,使用低剂量lldt-8（0.031mg/kg/2day）长期给药检测其预防给药的治疗效果。在经过18周治疗后,我们发现lldt-8能够显著减少nzb/wf1小鼠尿蛋白/肌酐比,提高小鼠生存率。这些数据表明lldt-8对nzb/wf1小鼠也具有良好的治疗作用。我们检测了nzb/wf1小鼠肾脏中浸润免疫细胞数目的变化情况,与在mrl/lpr小鼠上的观察结果一致,lldt-8治疗组小鼠肾脏中cd3+t细胞、cd4+th细胞以及cd11b+髓系细胞的比例有显著减少,cd8+ctl细胞比例也有一定程度的降低。再次证实lldt-8能够抑制炎症细胞对肾脏的浸润,对狼疮肾炎具有良好的治疗效果。最后我们在体外使用两种肾脏细胞系:人肾小管上皮细胞（hk-2）和小鼠肾小球系膜细胞（sv40mes13）,检测lldt-8对趋化因子表达的影响。我们选择ifn-γ和il-17来刺激肾脏细胞表达趋化因子,发现lldt-8能够显著抑制肾脏细胞表达ip-10、mig、mcp-1和il-6等炎性介质。并且我们还发现了il-17和ifn-γ对趋化因子及il-6的表达具有协同刺激效应,而lldt-8能够显著抑制il-17和ifn-γ的协同刺激效应。综上所述,本课题主要考察了lldt-8对狼疮肾炎小鼠的治疗作用,并且阐明了LLDT-8通过抑制趋化因子的表达,减少免疫细胞对肾脏的浸润,从而发挥对肾脏的保护作用。本研究为拓展LLDT-8在临床上的适应症提供了理论依据,也为雷公藤类化合物治疗自身免疫性疾病的研究提供新的思路与证据。