目的:①研究用于肿瘤磁流体热疗的纳米级Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米粒子的制备及特征检测。②研究As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4纳米材料的制备工艺及聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)在其表面的修饰，制备出一将来可用于热疗、化疗、基因治疗多重抗肿瘤作用的复合纳米材料。③构建survivin-shRNA载体，并将载体进行扩增和鉴定。通过转染HepG-2细胞，RT-PCR法检测survivinmRNA水平来测定其基因沉默的效率。④制备siRNA/As2O3磁性纳米脂质体，通过体外细胞实验和体内动物治疗实验来研究Mn0.5Zn0.5Fe2O4热疗，As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4热化疗及siRNA/As2O3磁性纳米脂质体联合治疗肝癌的作用。　　方法:①采用改良的化学共沉淀法制备Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米粒子。利用透射电镜(transmissionelectronmicroscope，TEM)，扫描电镜(scanningelectronmicroscope，SEM)，X射线衍射分析（x-raydiffraction，XRD），能谱仪(energydispersivespectrometer,EDS)对其形貌、物象、成份、磁性能及居里温度等进行分析表征，并在高频交变磁场（altematingmagneticfield,AMF）下检测其升温情况。MTT实验评价其体外细胞毒性。②采用超微粒子催化剂的制备方法—浸渍法来制备As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米材料，再在其表面进行PEI修饰。采用TEM、SEM、EDS、傅立叶红外光谱分析(Fouriertransforminfraredspectroscopy,FTIR)研究其表面特征。AMF下进行体外磁感应升温，观察PEI和As2O3在Mn0.5Zn0.5Fe2O4表面的吸附和修饰对其磁感应升温能力有无影响。琼脂糖凝胶电泳检测磁性粒子As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4与DNA结合情况，体外转染pEGFP质粒至肝癌细胞对其转染能力进行表征。③从GeneBank中检索人survivin基因全长mRNA序列（GeneBank序列号:NM-001168），并参考文献发表的有效序列，筛选出4条survivinsiRNA靶序列，并构建survivin-shRNA表达载体（短发夹RNA表达载体，可在细胞内由Dicer酶切割后得到siRNA），分别命名为1-4号，使用的载体为:pGPU6/GFP/Neo。使用PromegaPureYieldTMPlasmidMaxiprepSystemKit扩增survivin-shRNA表达载体。使用LipofectamineTM2000转染试剂，转染survivin-shRNA表达载体至HepG-2细胞，转染24小时和48小时后，用倒置荧光显微镜进行观察，拍照。转染48小时后收集细胞，用RT-PCR方法检测HepG-2细胞survivin-mRNA表达情况，筛选出基因沉默效率最高的一条surviVin—shRNA，用于进一步实验。④制备siRNA/As2O3磁性纳米脂质体。体外培养人肝癌HepG2细胞，各组细胞处理后通过MTT法检测细胞增值率，流式细胞仪测定细胞凋亡率。分组如下:空白对照组（RPMI1640培养液）、Mn0.5Zn0.5Fe2O4非热疗组、Mn0.5Zn0.5Fe2O热疗组、As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O热疗组、siRNA/As2O3磁性纳米脂质体热疗组。从VX2荷瘤兔身上取下肿块，剔除结缔组织和坏死组织后，用眼科剪剪成尽可能小的瘤粒（＜1mm3），接种于兔两后腿皮下作为传代。采用开腹瘤粒悬液注射法建立兔VX2肝癌模型，抽血查肝肾功能，术后14天行CT检查和DSA(digitalsubtractionangiography)造影。模型建立14天后，进行介入治疗和热疗，分组如下空白对照组、Mn0.5Zn0.5Fe2O4非热疗组、Mn0.5Zn0.5Fe2O4热疗组、As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O热疗组、siRNA/As2O3磁性纳米脂质体热疗组、阿霉素治疗组，每组6只。介入手术48小时后，将三组热疗组动物置交变磁场下进行热疗60分钟，共热疗三次，每次间隔48小时。所有实验动物都于介入术后14天处死，进行尸检，剥离肿瘤，用尺测量肿瘤的长短径，计算肿瘤体积。根据公式:肿瘤体积抑制率(％)=（1-实验组肿瘤体积/对照组肿瘤体积）×100％，计算肿瘤体积抑制率。常规制片，HE染色、光镜下形态学观察。免疫组织化学法（SP法）检测survivin的表达情况。　　结果:①自制的Mn0.5Zn0.5Fe2O4纳米粒近似圆形和球形，大小较一致，分散性良好，粒径约20-30mm。EDS分析其包含Mn，Zn，Fe三种元素，且Mn，Zn，Fe元素的摩尔比接近1∶1∶4;XRD显示制备的Mn0.5Zn0.5Fe2O4各衍射峰所对应的面间距（d值）与粉末衍射标准联合会(JCPDS)编制的代表物质为尖晶石型磁性的PDF(PowderDiffractionFile)卡片d值吻合一致，检索数据库证明为锰锌铁氧体。居里温度为210.1℃。在交变磁场下，浓度为159/L的Mn0.5Zn0.5Fe2O4可升温至45℃并保持恒定。37℃所制备的Mn0.5Zn0.5Fe2O4浸渍液对L-929细胞毒性为0～1级，无细胞毒性。②PEI-As2O3/Mn0.5Fe2O4电镜下外观仍为圆形或球形，分散性良好，大小较均匀一致，平均粒径为30-40nm。FTIR可见到PEI的-NH2和-CH2-特征峰的存在，EDS分析图谱可见N、As、Mn、Zn、Fe元素，验证了PEI和AS2O3在磁性纳米粒子表面的吸附。与Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米粒相比，它们升温能力相同。PEI/Mn0.5Zn0.5Fe2O4具有良好的DNA结合保护转染能力，可将外源pEGFP质粒转染至人肝癌HepG2细胞，24小时后即可见绿色荧光蛋白的表达。③survivin-shRNA转染HepG2细胞发现，转染24小时后即可见到绿色荧光蛋白(GFP)的表达，视野内荧光均匀分布，48小时后有更多细胞表达GFP，提示survivin-shRNA表达质粒已有效进入了HepG2细胞。转染48小时后，收集细胞，提取RNA进行RT-PCR检测survivin基因的沉默效率。1号survivin-shRNA的基因沉默效率为最佳，以GAPDH为内参照，1号survivin灰度比值较阴性对照组下降90％。结果提示，转染1号survivin-shRNA可介导HepG2细胞survivin基因沉默，实现survivin基因的靶向封闭，其相对应的survivinsiRNA序列为5’-GGACCACCGCATCTCTACA-3’。④MTT法显示，Mn0.5Zn0.5Fe2O4未热疗组细胞增殖率为95.38％，与对照组相比无明显差异(P＞0.05)。其余各组增殖率分别为78.51％、51.00％和38.96％，与对照组相比具备明显差异(P＜0.05)。各组HepG2细胞经处理48h后，空白对照组未见明显凋亡峰，凋亡率仅为1.6％，Mn0.5Zn0.5Fe2O4未热疗组为4.89％。Mn0.5Zn0.5Fe2O4热疗组凋亡率为21.07％，As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4热疗组为39.46％，siRNA/As2O3磁性纳米脂质体热疗组为41.93％。模型建立方法可成功建立兔VX2肝癌模型，并对实验动物的肝肾功能没有明显的影响，14天后肿瘤可于CT下显像，肿瘤长径平均可长至1.5-2cm，切面出血坏死少，无肝内外转移。种植14天后，DSA造影结果示肿瘤血管不规则，紊乱，肿瘤实质染色明显，内部染色不均匀。介入治疗完成后14天，动物尸检发现对照组肿瘤平均体积为34.29±9.24mm3，Mn0.5Zn0.5Fe2O4热疗组，As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O热疗组、siRNA/As2O3磁性纳米脂质体组与阿霉素组的体积抑制率分别为70.84％、85.19％、92.51％、49.14％，与对照组相比其肿瘤体积差异均有统计学意义(P＜0.05)，而单纯Mn0.5Zn0.5Fe2O4非加热组体积抑制率为1.87％，与对照组相比其肿瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05)。镜下观察可见各组肿瘤内部均可见到肿瘤组织坏死，结构紊乱，肿瘤核分裂像多见，周围正常肝组织结构清晰。C、D、E三组在镜下可见棕褐色的纳米磁粒子沉积在肿瘤及周围间质内，周围肿瘤组织有明显坏死，结构不清。免疫组织化学法示对照组肿瘤可见survlvm呈强阳性表达(+++)，siRNA/As2O3磁性纳米脂质体组肿瘤的表达呈明显下降，呈弱阳性表达(+)。　　结论:①采用改良的化学共沉淀法和浸渍法能成功制备出同时具备热疗、化疗和基因治疗三重功效的新型复合纳米材料PEI-As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4。②合成的survivin-shRNA可有效介导HepG2细胞survivin基因沉默，实现survivin基因的靶向封闭，为后面进一步进行肝癌的综合治疗提供了实验依据。③采用开腹瘤粒悬液注射法可以成功建立兔肝癌模型，肿瘤种植14天后，肿块大小在1.5-2cm，适合进行介入治疗。体外细胞实验和体内动物治疗实验均示Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性材料本身对肿瘤并无毒性作用，而将其置入交变磁场后进行热疗则具有良好的抑制肿瘤生长的效果。As2O3的加入可以具有更强的抑制肿瘤作用，而其中siRNA/As2O3磁性纳米脂质体组肿瘤体积抑制率最高，与其它组别均有显著差异，提示热疗、化疗、基因治疗这三者的结合可能起到了相互协同的作用。