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目的:
1、研究开口箭皂苷抗内毒素、抗炎作用。
2、研究开口箭皂苷对免疫功能的影响。
3、探讨开口箭皂苷对内毒素血症以及全身炎性反应综合征(SIRS)的应用前景。
方法:
1、采用水饱和正丁醇从开口箭植物的根茎中提取总皂苷。
2、将64只昆明种小鼠随机分为4组:模型组(生理盐水)、阳性药组(地塞米松5mg/kg)、STCB高、低剂量组(400，200mg/kg)。腹腔注射铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)60mg/kg制备小鼠内毒素中毒死亡模型，STCB预防性灌胃给药，观察中毒情况、小鼠存活率及存活时间。
3、将40只小鼠随机分为5组，腹腔注射铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)10mg/kg，摘眼球取血，制备血清，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测内毒素血症模型小鼠血清中白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。
4、取小鼠4只，Hanks液灌洗腹腔，收集腹腔渗出细胞体外培养，采用LPS刺激小鼠腹腔渗出细胞作为体外炎症模型，用(10，20，40μg/ml)STCB干预，在37℃下培养16h后ELISA法检测培养上清IL-1β和TNF-α的含量来观察STCB的抗炎作用。
5、正常小鼠40只，随机分为5组:DTH模型组、阳性药物(地塞米松10mg/kg)组、STCB高、中、低剂量(800、400、200mg/kg)组。给药组小鼠分别连续灌胃给药7d。于给药后第1日用1％二硝基氟苯(dinitro-fluorobenzene，DNFB)腹部涂抹致敏，末次给药后将1％DNFB涂抹于小鼠右侧耳廓，24h后处死动物，用打孔器取相同面积两侧耳片称重，比较给药组与模型对照组耳廓肿胀程度，并称取各组小鼠脾脏和胸腺，计算相关指数。
6、正常昆明小鼠40只，随机分为5组，即模型组、阳性药物组(地塞米松10mg/kg)，STCB高、中、低剂量(800，400，200mg/kg)组，每组8只。给药组小鼠分别连续灌胃干预药物7d。给药后第2天上午，各鼠腹腔注射20％(V/V)的生理盐水兔红细胞0.2ml进行免疫，同日下午继续给药，免疫后第6天，动物摘眼球取血，分离和收集血清用于血清溶血素水平测定。
7、取Balb/c小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，加入不同浓度的STCB，同时加入ConA或LPS刺激，在37℃下培养48h，用MTT比色法检测ConA和LPS诱导的小鼠脾细胞的(增殖)代谢活力。
8、取Balb/c小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，调节浓度后，加入4μg/mlConA刺激，用(20，40，80μg/ml)STCB干预，在37℃下培养16h后ELISA法检测培养上清IL-2的含量。
9、统计分析采用SPSS13.0统计软件，多个样本均数比较，经方差齐性检验后进行单因素方差分析(One-wayANOVA)，方差齐时，采用LSD方法进行组间两两比较;方差不齐时，用DunnettT3方法进行组间两两比较，显著性水准取α=0.05，以P＜0.05时，组间差异判断为具有统计学意义。
结果:
1、给内毒素半小时后，动物毛色开始失去光泽，呼吸急促，行动迟缓。随着时间的推移，动物开始蜷缩在一起，拒食，有些动物会阴部有大片潮湿，淹淹一息，20小时后陆续有动物死亡，存活动物48小时后逐渐恢复正常。内毒素休克模型实验中，经STCB(200，400mg/kg，连续5d)预处理的动物存活率高于模型组，其存活率依次为31.3％，37.5％和18.8％，但没有统计学意义(x2=1.424，P＝0.494)。不过内毒素休克模型实验中给STCB(200，400mg/kg)药组小鼠的存活时间明显长于模型组(P=0.051，P=0.028)。
2、正常小鼠血清促炎细胞因子IL-1β和TNF-α的含量很低，腹腔注射LPS后3小时，小鼠血清中的IL-1β和TNF-α的含量明显升高(P＜0.001，P＜0.001)，分别达到基础水平的47倍和67倍。经开口箭皂苷(200，400mg/kg)预处理的动物血清IL-1β和TNF-α的含量升高的幅度均低于LPS模型组，IL-1β的含量分别下降24％和42％(P＝0.247，P=0.006)，TNF-α的含量分别下降31％和41％(P=0.047，P=0.004);体外STCB(10，20，40μg/ml)明显抑制由LPS诱导的小鼠腹腔渗出细胞分泌的TNF-α(P=0.023，P＜0.001，P＜0.001)，高剂量STCB(40μg/ml)可抑制IL-1β的产生(P＝0.013)。
3、STCB高、中、低三个剂量中(800，400，200mg/kg)，只有高剂量可以显著降低DTH小鼠耳廓肿胀度(P=0.018)以及胸腺指数(P＝0.020)，但对脾指数无显著影响(P=0.062)。
4、高剂量开口箭总皂苷(800mg/kg)可显著抑制溶血素的作用(P＝0.001)，中、低剂量(400，200mg/kg)不明显(P＝0.064，P=0.512)。
5、高剂量开口箭总皂苷(80μg/ml)可显著抑制ConA或LPS刺激的小鼠脾细胞增殖反应(代谢活力)(P＜0.001，P＜0.001)，同时亦可抑制IL-2的产生(P=0.011)，中浓度(40μg/ml)可显著抑制ConA或LPS刺激的小鼠脾细胞增殖反应(P=0.001，P＜0.001)，对IL-2的分泌无明显影响(P=0.061)，开口箭总皂苷低浓度(20μg/ml)组与ConA组或LPS组相比没有统计学意义(P＝0.136，P＝0.061)，对IL-2的分泌亦无明显影响(P=0.330)。
结论:
1、采用腹腔注射铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)60mg/kg、10mg/kg成功建立小鼠内毒素中毒休克致死模型和内毒素血症模型;
2、STCB具有一定抗LPS毒性作用，能使内毒素休克模型小鼠的存活时间显著延长;
3、整体实验中，STCB能够明显抑制内毒素血症小鼠血清中细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌;体外实验表明STCB能直接抑制被活化的巨噬细胞功能;
4、成功建立迟发型超敏反应小鼠实验模型和溶血素实验模型;
5、STCB高剂量时对细胞免疫和体液免疫有一定的抑制作用，中、低浓度抑制表现不显著;
6、高剂量STCB可抑制ConA活化后的脾细胞分泌IL-2，提示STCB可能通过抑制IL-2的分泌从而抑制免疫功能。